201804. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2-keto-L-gulonsav előállítására mikrobiológiai úton
HU 201804B hőmérsékleten inkubálva rázás közben 2 napig a TH 14-86 törzstenyészetét állítjuk elő. Az 1. táblázat szerinti közegen 28 *C hőmérsékleten 2 napig tenyésztett Bacillus megaterium tenyészetből egy kacsnyival beoltjuk egy 200 ml-es lombikban levő, 20 ml előtenyészeti közeget, s ezt 28 ’C hőmérsékleten 2 napig rázás közben inkubálva a kísérő baktérium törzstenyészetét állítjuk elő. 3 liter fermentációs közegből, mely 3,0% külön sterilezett L-szorbózt, 2,0% CSL-t, 0,2% szárított élesztőt, 0,3% ammónium-szulfátot, 0,05% nátrium-tioszulfátot, 0,1% vas-szulfátot, 0,02% Actcolt és 9,0% kalcium-karbonátot tartalmaz, 2,1 litert 120 *C hőmérsékleten 30 percig sterilezünk. A sterilezett közeget egy 5 literes fermentorba töltjük. Ehhez a közeghez 300 ml fenti TH 14-86 törzstenyészetet és 4 ml kísérő baktérium törzstenyészetet adunk, és a tenyésztést 30 *C hőmérsékleten 2,4 liter/perc levegőztetéssel és 800 fordulat/perc keveréssel hajtjuk végre. Ettől elkülönítve, 510 g L-szorbózt oldunk vízben, így 800 ml szorbóz oldatot készítünk, és 120 °C hőmérsékleten 20 percig stcrUezzük. Ezt a sterilezett oldatot folyamatosan adjuk a fermentorhoz a tenyésztés 6. órájától a 24. órájáig. Az L-szorbóz hozzáadása után a tenyésztést , ugyanolyan körülmények között folytatjuk további 28 órán keresztül. (Teljes tenyésztési idő: 70 óra.) A kapott fermentlé 163,5 mg/ml 2-keto-L-gulonsavat tartalmaz. Átalakítási arány: 75,8%. 19 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás 2-keto-L-gulonsav előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely Pseudogluconobacter saccharoketogenes fajhoz tartozó mikroorganizmust vagy annak mutánsát, adott esetben más mikroorganizmussal együtt, L-szorbóz jelenlétében tenyésztünk, majd a 2-keto-L-gulonsavat a közegből kinyerjük. (Elsőbbsége: 1985.10.22.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy mikroorganizmusként Pseudogluconobacter saccharoketogenes K591s-t (FERM BP- 1130), 12-5-öt (FERM BP-1129) vagy TH 14-86-ot (FERM BP-1128) tenyésztünk. (Elsőbbsége: 1985.10.22.) 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy mikroorganizmusként Pseudogluconobacter saccharoketogenes 12-15-öt (FERM BP- 1132), 12-4-et (FERM BP-1131) vagy 22-3-at (FERM BP-1133) tenyésztünk. (Elsőbbsége: 1985.12.24. ) 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy Pseudogluconobacter saccharoketogenes fajhoz tartozó mikroorganizmust legalább egy, a Bacillus cereus, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus pumilus, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus subtilis. Pseudomonas trifolii, Proteus inconstans, Citrobacter freundii, Enterobacter colacae, Erwinia herbicola, Xanthomonas pisi vagy Flavobacterium meningosepticum fajhoz tartozó baktérium és L-szorbóz jelenlétében tenyésztjük (Elsőbbsége: 1985.10.22.) 5. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a Pseudogluconobacter saccharoketogenes fajhoz tartozó mikroorganizmusként Pseudogluconobacter saccharoketogenes K591s-t (FERM BP- 1130), 12-5-öt (FERMBP-1129), vagy TH 14-86-ot (FERM BP-1128) tenyésztünk. (Elsőbbsége: 1985.10.22. ) 6. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a Pseudogluconobacter saccharoketogenes fajhoz tartozó mikroorganizmusként Pseudogluconobacter saccharoketogenes 12-15-öt (FERM BP- 1132), 12-4-et (FERM BP-1131) vagy 22-3-at (FERM BP-1133) tenyésztünk. (Elsőbbsége: 1985.12.24. ) 7. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy Pseudogluconobacter saccharoketogenes fajhoz tartozó mikroorganizmusként Pseudogluconobacter saccharoketogenes TH 14-86 ot (FERM BP-1128), második mikroorganizmusként Bacillus cereust, Bacillus licheniformis t, Bacillus megateriumot, Bacillus pumilust, Bacillus amyloliquefacienst, Bacillus subtUist, Pseudomonas trifoliit, Pseudomonas matophiliát, Proteus inconstanst, Citrobacter freundiit, Enterobacter cloacae-t, Erwinia herbicolat,Xanthomonas pisit vagy Flavobacterium meningosepticumot tenyésztünk. (Elsőbbsége: 1985.10.22. ) 8. A4, igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a Pseudogluconobacter saccharoketogenes fajhoz tartozó mikroorganizmusként Pseudogluconobacter saccharoketogenes K591s-t (FERM BP- 1130) vagy 12-5-öt (FERMBP-1129), míg második mikroorganizmusként Bacillus cereust, Bacillus megateriumot, Bacillus pumüist, Bacillus subtüist, Pseudomonas trifoliit, Pseudomonas maltophiliát, Citrobacter freundiit, Enterobacter colacaet vagy Erwinia herbicolát tenyésztünk. (Elsőbbsége: 1985.10.22. ) 20 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 11
