201775. lajstromszámú szabadalom • Eljárás interferon tisztítására
HU 201775 B 5 6 P6F4 plazmiddal, FERM BP-282. számon lett letétbe helyezve 1983.07.18-án, illetve 1983.05.02-án a Budapesti Egyezmény szerint. A transzformált törzs az alábbi I képletű aminosavszekvenciával rendelkező GIF146 nevű polipeptidet termeli: 5 1 10 Cys Tyr Cys Gin Ysp Pro Tyr Val Lys Glu 20 Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Alá 30 10 Gly His Ser Asp Val Alá Asp Asn Gly Thr 40 Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys 50 15 Glu Glu Ser Asp Arg Lys lie Met Gin Ser 60 Gin Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Lue Pha 70 Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gin Ser Ile Gin 80 20 Lys Ser Val Glu Thr lie Lys Glu Asp Met 90 Asn Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys 100 25 Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn HO Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gin Arg 120 Lys Als lie His Glu Leu lie Gin Val Met 130 30 Ala Glu Leu Ser Pro Ala Alá Lys Thr Gly 140 Lys Arg Lys Arg Ser Gin Met Leu Phe Arg 146 35 Gly Arg Arg Ala Ser Gin GTC TAG CCA AGA AAG ATB AAG TTC GACAAG AAA AAC TTC AAG GAC GAC CAG TCT ATC CAG TTT TTG AAG TTC CTG CTG GTC AGA TAG GTC AAA TCT GTT GAA ACT ATC AAG GAA GAG ATB TTT AGA CAA CTT TGA TAG TTC CTT CTGTAC AAC GTT AAG TTC TTC AAC TCT AAC AAG AAA TTG CCA TTC AAG AAG TTG AGA TTG TTC TTT AAG CGT GAC GAC TTC GAA AAG CTT ACT AAC TTC GCA CTG CTG AAG CTT TTC GAA TGA TTG TAC TCT GTT ACT GAC CTT AAT GTA CAG CGT ATG AGA CAA TGA CTG GAA TTA CAT GTC GCA AAA GCT ATC CAT GAA CTG ATC CAG GTT ATG TTT CGA TAG GTA CTT GAC TAG GTC CAA TAC GCT GAA CTG TCC CCG GCT GCT AAA ACTGGT CGA CTT GAC AGG GGC CGA CGA TTT TGA CCA AAG CGT AAA AGA TCT CAG ATG CTG TTC CGT TTC GCA TTT TCT AGA GTC TAC GAC AAC GCA GGT CGT CGT GCT TCT CAG TAA CCA GCA GCA CGA AGA GTC ATT A GIF 146-ot termelő törzs tehát egy olyan Escherichia coli W3110 törzs, amelyet a fenti képletű GIF146-ot kódoló DNS fragmentumot tartalmazó pIN5T4 plazmiddal transzformálunk. E vektor DNS szekvenciáját a II képlettel fejezzük ki: TGC TAC TGC CAG GAC CCA TÁV GTG AAG GAA ACG ATG ACG GTC CTG GGT ATG CAC TTC CTT GCT GAA AAC CTG AAG AAA TAC TTC AAC GCT CGA CTT TTG GAC TTC TTT ATG AAG TTG CGA GGT CAT TCT GAC GTT GCT GAC AAC GGT ACT CCA GTA AGA CTG CAA CGA CTG TTG CCA TGA CTG TTC CTG GGT ATC CTG AAA AAC TGGAAA GAC AAG GAC CCA TAG GAC TTT TTG ACCTTT GGA GGA TCT GAC CGT AAA ATC ATG CAG TCT CTT CTT AGA CTG GCA TTT TAG TAC GTC AGA CAG ATC GTT TCT TTC TAC TTC AAG CTG TTC Másrészt a W3110/pIN5T4N143 törzset, amely h-IFN-^ aktivitású polipeptid termelésére képes 40 — a polipeptidet a III képlet szerinti aminosav szekvencia jellemzi — az alább leírt referencia példa szerint állítjuk elő. E polipeptid neve: GIF143. 1* 10 45 Gin Asp Pro Tyr Val Lys Glu Alá Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Alá Gly His Ser Asp Val Ala Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser 50 50 Asp Arg Lys lie Met Gin Ser Gin Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gin Ser Ile Gin Lys Ser Val Glu Thr lie Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp 55 100 Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gin Arg Lys Alá Ile His Glu Leu Ile Gin Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys 60 140 Arg Ser Gin Met Leu Phe Arg Gly Arg Arg 143 Ala Ser Gin e 65 Ebben az aminosav szekvenciában a Gin Gin 4
