201679. lajstromszámú szabadalom • Eljárás retrovirus-fertőzések elleni szinergista hatású gyógyászati készítmények előállítására
11 HU 201 679 B 12 micinnel egészítünk ki. A tenyészeteket 18 órán át inkubáljuk 37 *C-on, majd a felülúszó folyadékokat olyan friss DME táptalajra cseréljük ki, amely mentes az interferontól, tumomekrózis faktortól vagy a kataláztól, azonban 2% magzati boíjúszérumot és EMC vírust tartalmaz, ahol a fertőzés mértéke (,>101”, az egy sejtre jutó fertőző vírusok száma) 1. A citopatikus hatást (CPE) úgy határozzuk meg, hogy kristályibolyával megfestjük az életképes sejteket, majd kvantitative mérjük mikroeliza önleolvasó készülék (MR580, gyártó: Dynatech) segítségével, és további vizuális kiértékelést is alkalmazunk. A CPE vírusellenes titat annak a hígításnak a reciprokaként fejezzük ki, amely a sejtcitopátia 50%-át gátolja. A kalibráláshoz emberi gammainterferon nemzetközi vonatkoztatási mintát (Gg 23- 901-630) használunk. Amint az a 2. ábrán látható, a kataláz rendkívüli mértékben és szinergista módon növeli a gamma-interferon és a tumomekrózis alfa-faktor vírusellenes hatását. Ez a hatás nem korlátozódik az EMC vírusra, hanem sokféle, vírusfertőzésre hajlamos sejt és sokféle vírus esetén megfigyelhető. Ugyanezt az eljárást a leírt módon, de kataláz enzim helyett szuperoxid demutáz, klórperoxidáz, illetőleg peroxidáz enzim (1CN Biochemicals, Ohio, USA) ugyanilyen mennyiségeinek alkalmazásával megismételve azt tapasztaljuk, hogy az említett enzimek mindegyikének tumomekrózis alfa-faktorral és gamma-interferonnal való kombinációja esetében a kombináció hasonlóan nagymértékű szinergista hatást mutat SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás retrovírus-fertőzések elleni szinergista hatású gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy tumomekrózis alfa-faktort 1,0 ng/ml és 1,0 mg/ml közötti koncentrációban, és gamma-interferont 1,0 ng/ml és 1,0 mg/ml közötti koncentrációban, kívánt esetben oxigéntartalmú szabad gyököt megkötő enzimként kataláz, peroxidáz, klór-peroxidáz vagy szuperoxid-demutáz enzim és/vagy HIV-antitest hozzáadásával, gyógyászati szempontból elfogadható, injekció útján történő beadásra alkalmas vivőanyaggal összekeverve gyógyászati készítménnyé alakítunk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy gamma-interferonként természetes eredetű vagy rekombináns sejttenyészetbent érméit, legalább 1.10* NE/mg fajlagos aktivitású gamma-interferont használunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy tumomekrózis alfa-faktorként természetes, előnyösen humán eredetű vagy rekombináns sejttenyészetben termelt, előnyösen legalább 1.106 egység/mg, érzékeny L-929 egérsejteken mért fajlagos alfa-faktort használunk. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a tumomekrózis alfa-faktort és gamma-interferont 100:1 és 1: 100 közötti mennyiségi arányban alkalmazzuk. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy kataláz enzimként humán eritrocita katalázt alkalmazunk. 5 10 15 20 25 30 7
