201353. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 15-keto-csoportot tartalmazó prosztaciklin-közbenső termékek mikrobiológiai redukciójára
3 HU 201353 B 4 a találmány szerinti eljárás során más módszerrel is fokozható) mely a fermentációs szakemberek számára közismert. Az optimális szubsztrát-koncentráció, a szubsztrát adagolásának időpontja és a fermentáció időtartama mindenkor az alkalmazott szubsztrátum szerkezetétől és az alkalmazott mikroorganizmustól függ. Mint az biológiai átalakításoknál általános, jelen esetben is célszerű elökisérleteket végezni, mely szakemberek számára igen könnyen elvégezhető. A Canida solani NCYC 41 és Pichia farinosa CBS 185 törzseket a mikroorganizmusok németországi gyűjteményében DSM 3315 és DSM 3316 számon helyeztük letétbe, a Pichia farinosa Y-118 jelű törzs az NRRL gyűjteményben hozzáférhető. Az alábbi példák a találmány részletes ismertetésére szolgálnak. 1. példa 2 1-es Erlenmeyer lombikba 1,5% glükóz-monohidrátot, 0,5% élesztő-extraktumot (Dif— co), 0,5% kukoricalekvárt és 0,5% ammónium-szulfátot tartalmazó tápoldatot helyezünk (30 percen át 120 °C hőmérsékleten sterilizálva, pH = 6,3), majd Candida solani (NCYC 41) törzs ferde agaros tenyészetéről beoltjuk, és rotációs rázógépen 30 °C hőmérsékleten 2,5 napon át rázatjuk. A fenti tenyészet 250 ml-ével 20 1-es előfermentort oltunk be, mely 15 1 fenti öszszetételű, 30 percen át 121 °C hőmérsékleten 1,1 bar túlnyomáson sterilizált táptalajt tartalmaz. Habzásgátlóként Silicon SH-t alkalmazunk, és a fermentációt 25 °C hőmérsékleten, 0,7 bar túlnyomáson, 15 1/perc levegőztetés és 220/perc keverés közben 36 órán ét folytatjuk. Ezután 0,9 1 előfermentációs levet steril körülmények között lefejtünk, és azzal 20 1- -es fófermentort oltunk be, mely 10 1 fenti összetételű táptalajt tartalmaz. 6 órás növekedési fázist követően a fermentorba 4 g (lS,2S,3R,5R)-7,7-etilén-dioxi-3-benzoil-oxi-2- -[(lE),4(RS)-4-metil-3-oxo-okt-l-én-6-in-ilj-biciklo[3.3.0]oktén [az (1) képletű vegyület] 100 ml dimetil-formamiddal készitett, steril oldatát adjuk, és a keverést és levegőztetést tovább folytatjuk. 90 órás kontaktidő után befejezzük a fermentációt. A tenyészlevet háromszor metilizobutil-ketonnal extraháljuk, az extraktumokat egyesitjük, és vákuumban szárazra pároljuk. Az olajos maradékot metanolban felvesszük, szilikonolajtól szűrjük, és ismét szárazra pároljuk. A visszamaradt olajos, nyers terméket metilén-kloridban oldjuk, és további tisztítás céljából szilikagéllel töltött oszlopon 5 1 hexán/4 1 hexán +11 aceton oldószer-grandienssel kromatograféljuk. Ily módon 2,75 g tiszta (lS,2S,3R,5R)-7,7-etilén-dioxi-3-benzoil-oxi-2-[(lE),(3S,4RS)-3-hidroxi-4-metil-okt-l-en-6-in-il]-biciklo[3.3.0]oktánt nyerünk, színtelen olajként. NMR-spektrum, delta (ppm): 0,85, 0,86, 1,73, 1,75, 3,83-3,96, 4,02-4,06, 4,97-5,08, 5,09-5,17, 7,42-7,47, 7,53-7,59, 7,99-8,03. IR-spektrum (cm-1): 3480, 3060, 3030, 2960, 2930, 2880, 1718, 1601, 1585, 1275, 1115, 1090, 1070, 1027, 972, 713. 2. példa Az 1. példában leírtak szerint járunk el, azonban a ketocsoport redukciójához Pichia farinosa (NRRL-y-118) törzset alkalmazunk. 3. példa Az 1. példában leírtak szerint járunk el, azonban a keto-redukcióhoz Pichia farinosa (CBS 185) törzset használunk. 4. példa Az 1. példában leírtak szerint eljárva, a (3) képletű vegyületet Candida solani (NCYC 41) törzzsel a megfelelő 15oC-hidroxi-vegyületté redukáljuk. NMR-spektrum, delta (ppm): 0,90, 0,91, 1,78, 3,95-4,12, 4,12- -4,28, 4,97, 5,34, 5,56-5,70, 7,31- -7,67, 7,90-8,05. IR-spektrum (cm-1): 3500, 3060, 3030, 2965, 2920, 2875, 2860, 1771, 1715, 1601, 1585, 1275, 1114, 1071, 1051, 1027, 972, 714. 5. példa Az 1. példában leírtak szerint eljárva, a (4) képletű vegyületet Candida solani (NCYC 41) törzzsel a megfelelő 15oC-hidroxi-vegyületté redukáljuk. NMR-spektrum, delta (ppm): 0,98, 1,07, 3,00, 3,84-3,96, 4,32, 5,19-5,26, 7,43-7,48, 7,56-7,61, 8,00-8,05. IR-spektrum (cm"1): 3465, 3065, 3035, 2970, 2939, 2882, 2855, 2233, 1721, 1602, 1584, 1275, 1115, 1090, 1071, 1027, 714. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
