201296. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-szubsztituált-1-(alkil-amino)-2-propanolok sztereospecifikus előállítására
HU 201296 B királis HPLC oszlopon (Daicel chiralcel OD;25 cm x 4,6 mm; mozgó fázis: hexán, 2-propanol és dietilamin 800:200:1; 0,6 ml/perc, UV-detektálás 254 nm) végzett vizsgálatával igazoljuk. A kémiai szintézissel előállított 4-(2-ciklopropilmetoxi-etil)-fenil-glicidil-éter elemzése két, körülbelül egyenlő intenzitású csúcsot mutat a racemátnak megfelelően. A Pseudomonas oleovorans alkalmazásával előállított minta csak egy kimutatható csúcsot mutat, amely a kémiai szintézissel készített minta egyik csúcsának felel meg. 14. példa (4-Metoxi-fenil)-allil-éter átalakítása ( + )-(4- metoxi-fenil)-glicidil-éterré Pseudomonas oleovorans ATCC 29347 törzzsel Pseudomonas oleovorans ATCC 29347 0,5 g/1 dietoxi-metánt tartalmazó, 100 ml PSX ásványi sós közegben (pH = 7,0) 7,5 g/1 glicerinen 30 °C-on tenyésztett 24 órás biomasszáját 10 ml PSX közeget (pH = 7,5), 5 g/1 etanolt és 25 g/1 (4-metoxi-fenil)allil-étert tartalmazó 250 ml-es Erlenmeyer-lombikba töltjük. A lombik tartalmát 37 °C-on körkörös rázógépen inkubáljuk, és mintákat veszünk, amelyeket diklór-metánnal extrahálunk a 13. példában ismertetett módon végzett gázkromatografálás előtt. A ( + )-(4-metoxi-fenil)-glicidil-éter termék egy órás inkubálás után jelenik meg, és 4 óra alatt 0,57 g/1 koncentrációra dúsul. Megfelelő mennyiségű ( + )-(4-metoxi-fenil)glicidil-éter feldúsítására az előbb leírt körülmények között három óra hosszat, de 2 literes lombikokban inkubált 6x87 ml-es tenyészeteket 780 ml diklór-metánnal extraháljuk. A kivonatot nátriumszulfáton szárítjuk, az oldószert elpárologtatjuk, és az epoxidot kovasavgélen hexán és éter elegyével tisztítve 190 mg ( + )-(4-metoxi-fenil)-glicidil-étert kapunk, [a] d = +4,1° (c = 1,0, kloroformban). A termék tömeg- és PMR spektruma megfelel a kívánt szerkezetnek, és azonos a kémiai szintézissel előállított (4-metoxi-fenil)-glicidil-éter spektrumával. A termék optikai tisztaságát enantiomerjeinek királis HPLC oszlopon a 13. példában leírt módon való szétválasztásával határoztuk meg, de mozgó fázisként hexán, 2-propanol és dietil-amin 900:100:1 arányú elegyét használtuk. A kémiai szintézissel előállított (4-metoxi-fenil)glicidil-éter elemzése két, körülbelül egyenlő intenzitású csúcsot mutat a racemátnak megfelelően. A Pseudomonas oleovorans alkalmazásával előállított minta csak egy kimutatható csúcsot adott, amely a kémiai szintézissel készített minta egyik csúcsának felel meg. 15. példa para-Szubsztituált fenil-allil-éterek átalakítása Pseudomonas oleovorans ATCC 29347 törzzsel megfelelő, optikailag aktív para-szubsztituált fenilglicidil-éterekké Pseudomonas oleovorans ATCC 29347 0,5 g/1 dietoxi-metánt tartalmazó, 100 ml PSX ásványi sós közegben (pH = 7,0) 7,5 g/1 glicerinen 30 °C-on tenyésztett 24 órás biomasszáját 10 ml PSX közeget 15 (pH=7,5), 5 g/1 mennyiségét tartalmazó 250 ml-es Erlenmeyer-lombikba töltjük. (Etoxi-fenil)-alliléter és (fenil-fenil)-allil-éter esetében a prekurzort vízzel készült, 5% Tween’80-at tartalmazó, golyósmalomban őrölt, 10%-os szuszpenzióként alkalmazzuk. A lombikokat 37 °C-on körkörös rázógépen inkubáljuk, és mintákat veszünk, amelyeket diklór-metánnal extraháljunk a 13. példában ismertetett módon végzett gázkromatografálás előtt. Az aril-glicidil-éter termékek három órás inkubálás után jelennek meg, és öt óra alatt az alábbi koncentrációkra dúsulnak: Vegyidet Koncentráció (g/l) 16 I (4-klór-fenil)-glicidil-éter l,9i II (4-etoxi-fenil)-glicidil-éter 0,15 III (4-fluor-fenil)-glicidil-éter 0,2é IV [4/(metil-tio)-fenil]-glicidil-éter 1,52 V (4-nitro-fenil)-glicidil-éter 3,02 VI (4-fenoxi-fenii)-glicidil-éter 0,22 VII (4-fenil-fénil)-glicidil-éter 0,43 A termékek optikai tisztaságát enantiomerjeiknek királis HPLC oszlopon a 13. példában (II-VI vegyületek), illetve a 14. példában (I, III és VII vegyületek) leírt módon való szétválasztásával határoztuk meg. A kémiai szintézissel előállított aril-glicidil-éterek elemzése két, körülbelül egyenlő intenzitású csúcsot mutat a racemátnak megfelelően. A Pseudomonas oleovorans alkalmazásával előállított minta csak egy kimutatható csúcsot adott, amely a kémiai szintézissel készített minta egyik csúcsának felel meg. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az (I) általános képletű 3-szubsztituáii l-(alkil-amino)-2-propanolok - a képletben Rl jelentése fenilcsoport vagy karbamoil-(l-4 szénatomos)-alkil- vagy (1- 4 szénatomos)-alkoxi(1-4 szénatomos) alkilcsoporttal szubsztituált fenilcsoport, R2 jelentése 2-6 szénatomos alkilcsoport -vagy gyógyszerészetileg elfogadható savaddíciós sóik szíereospecifikus formában való előállítására. azzal jellemezve, hogy egy (III) általános képletű vegyületet - a képletben Rí jelentése az (I) általános képletnél megadottakkal azonos -Nocardia corallina, Rhodococcus sp. (NCIB 11277), Mycobacterium rhodochrous, Rhodococcus equi, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas oleovorans, Pseudomonas putida, Myobacterium WM1 (NCIB 11626) mikroorganizmussal szterospecifíkusan epoxidálunk, és a kapott (II) általános képletű fenil-(2,3-epoxi-l-propil)-étert - Rí a fenti - 2-6 szénatomos alkil-aminnal reagáltatjuk, és a keletkezett (I) általános képletű vegyületet gyógyszerészetileg elfogadható sójává alakítjuk át. (Elsőbbsége: 1985.02.13.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 2-6 szénatomos alkil-aminként izopropilamint vagy terc-butil-amint használunk. (Elsőbbsé-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
