201296. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-szubsztituált-1-(alkil-amino)-2-propanolok sztereospecifikus előállítására
HU 201296 8 Az optikai tisztaságot Eu(hfc)3 európium shiítreagens jelenlétében az 1. példában leírtakhoz hasonlóan protonmágneses rezonanciaspektroszkópiával vizsgáljuk. A shift-reagens hozzáadására az egyes gemmális protonoktól származó jelek burkoló görbéje a kémiailag szintetizált ( ± )-fenii-glicidil-étcrben lefelé tolódik, és mindegyik két egyenlő intenzitású jelsávra hasad fel, míg a mikrobiológiailag előállított ( + )-fenil-güddil-éterben lévő geminális protonoktól származó jelek sávja 6,7:1 arányban hasad fel. Ez az eredmény azt jelzi, hogy a molekulák 87%-a van az egyik enantiomer formában, ami 74%-os optikai tisztaságnak felel meg. A mikrobiológiai és kémiai forrásból származó epoxidok keverékének analízise olyan jelarányt ad, ami azt tanúsítja, hogy a ( + )-feml-glicidil-éter 90%-a van az egyik enantiomer formában, ami 80%-os optikai tisztaságot jelent. A ( + )-fenil-glicidil-éter optikai tisztaságának további vizsgálatát (-)-3-fenoxi-l-(izopropil-amino)-2-propanollá való átalakítása után végezzük el 300 mg (-t-)-fenil-glÍcidil-étert (a 2. példában leírtak szerint) izopropil-aminnal reagáltatva 125 mg (-)-3-fenoxi-l-(izopropil-amino)-2-propanolt kapunk, amelynek olvadáspontja 42-44 °C; [aj d - -6,51° (c = 0,984; etanol). Hasonlóképpen szintetizálunk (±)-3-fenoxi-l(izopropil-amino)-2-propanolt ( ± )-fenil-glicidiléterből. A (-)-3-fenoxi-l-(izopropil-amino)-2-propanol protonmágneses rezonanciaspektruma és tömegspektruma (5. és 6. ábrák) és a (± )-3-fenoxi-l(izopropil-amíno)-2-propanol hasonló spektrumai (itt nem ábrázoljuk) egyeznek a megfelelő szerkezettel. Optikai tisztaságot a megfelelő S-leucil-diasztereomer származékok nagyhatékonyságú folyadékkromatográfiájával mérünk (mint a 2. példában) és 80%-nak határozzuk meg. 9. példa (4-Allil-oxi-fenil)-acetamid átalakítása Pseudomonas oleovorans ATCC 29347-tel ( + )-[4/(2,3- epoxi/propoxi)-fenil]-acetainiddá, majd ennek ái alakítása (-)-3-(izopropiI-amino)-l-[4-(karbamoilmetil)-fenoxi]-2-propanollá, (-)-Atenolol-lá. Pseudomonas oleovorans ATCC 29347 szuszpenziót készítünk (0,75% nátrium-laktátot és 0,05% dietoxi-metánt tartalmazó PSX ásványi sós táptalajon, pH 7-en, 30 °C-on 24 óra hosszat tenyésztett) sejtek 7,5 pH-jú PSX táptalajban az eredeti sejttenyészet térfogata egytizedének megfelelő térfogatára való reszuszpendálásával. A PSX táptalaj 8,92 g/liter kálium-dihidrogén-foszfátot, 294 g/liter dinátrium-hidrogén-foszfátot, 0,2 g/liter ammónium-szulfátot, 0,2 g/liter kálium-kloridot, 0,294 g/liter trinátrium-citrátot, 0,005 g/liter kalciumszulfát-dihidrátot, 0,2 g/liter magnézium-szulfátheptahidrátot és 10 ml/liter PS II nyomelem oldatot tartalmaz. A PS II nyomelem oldat összetétele: 0,25 g/liter vas(II)-diammónium-szulfát-hexahidrát, 0,05 g/liter cink-szulfát-heptahidrát, 0,03 g/liter mangán (Il)-klorid-tetrahidrát, 0,015 g/liter réz(II)szulfát-pentahidrát, 0,015 g/liter kobalt(II)-kloridhexahidrát, 0,005 g/liter bórsav, 0,0055 g/liter nátrium-molibdenát-dihidrát, 0,01 g/liter kálium-jodid, sósavval pH 3,0-ra állítva. 11 Egy 2,5 literes Erlenmeyer-lombikba 1100 ml sejtszuszpenziót rázóasztalon 30 °C-on 3,3 g 4-(alliloxi-fenil)-acetamiddal inkubálunk, amelyet 5% Tween-80-at tartalmazó vízzel golyósmalomban készített 10%-os szuszpenzióként adunk a sejtszuszpenzióhoz. Az inkubák elegyet 72 ófa múlva 1000 ml dildór-metánnal extraháljuk, az oldatot megszárítjuk, majd bepároljuk. Utána a maradékot acetonból átkristályosítva 2,27 g fehér kristályos anyagot kapunk, amelynek összetétele 90% (4-alliloxi-fenil)-acetamid és 10% [4-(2>epo»-propoxi)fenilj-acetamid a nagyhatékonyságú folyadékkromatográfiás meghatározás szerint. [Oszlop: Lichrosorb RP8 (10 pm), 25 cm x 1/4 (6,35 mm) külső átm., 4,9 mm belső átm., mozgó fázis 40% acetonitril vfeben, 2 ml/perc, UV detektálás]. A körülbelül 230 mg [4-(23*epoxi-propoxi)-fenil]-acetamidot tartalmazó kristályosított extraktumot 40 ml vízmentes etanolban oldjuk, utána 2,5 ml izopropil-aminnal visszafolyó hűtő alatt 5 óra hosszat forraljuk, majd a felesleges oldószert eldesztilláljuk. A maradékot 50 ml diklór-metánban oldjuk, és 3 x 50 ml 0,2 n sósavoldattaJ extraháljuk. A savas fázisokat egyesítjük, diklór-metánnal mossuk, majd utána 5 n nátrium-hidroxid oldattal megiugosítjuk. A keletkező fehér csapadékot 3 x 100 ml diklór-metánnal extraháljuk, az extraktumot nátrium-szulfáton szárítjuk, majd az oldószert ledesztilláljuk. A kapott fehér szilárd anyag hexán/etil-acetát elegyből végzett átkristályosításával 76 mg (-)Atenololt kapunk, amelynek olvadáspontja 146- 148 “C, [upD = -3,9° (c » 1,01; etanol). A protonmágneses rezonanciaspektrum (CHCb, 360 MHz) adatai: 8 1,1 (d,6H,ch3); 8 1,5- 2.5 sáv (s, 2H, NH, OH); ó 2,82 (m, 1H, NHCH); 8 2,75/2,95 (m, 2H. CH2NH); 8 3,53 (s, 2H, COCH2); 8 3,98 (m, 3H, -0-CH2 CH-); 8 5,35 sáv (s, 2H, NH2); 8 6,9 (d, 2H, para-szubsztituált aromás); 8 7,2 (d, 2H, para-szubsztituált aromás). A kémiai ionizációs (NH3) tömegspektrum egy m/e 267 (M + H) + molekuláris iont adott, 266 molekulasúlyt jelezve, ami egyezik a feltételezett tömeggel. A protonmágneses rezonanciaspektrum és a tömegspektrum azonos a kémiailag előállított ( ± )-Atenolol hasonló adataival. A (-)-Atenolol optikai tisztaságát dibenzoil-borkősav-monoészter diasztereomer-származékainak fordított fázisú nagyhatékonyságú folyadékkromatográfiás oszlopon [Uchrosorb RP8 10pm), 25 cm X1/ (6,35 mm) jfülső átmérő, 4,9 mm beúő átmérő, mozgó fyzisify ecetsav (pH 3,7-ra ammóniával) 50:50 metanol, 1,5 ml/perc] való elválasztásával határozzuk meg. A származék készítését ( ±)- vagy (-)-Atenolol (R,R)-0,0-dibenzoil-borkósavanhidriddel a W.Linder és munkatársai által a J.Chrom. 316,605-616 (1984)-ben leírtak szerint való reagáltatásával végezzük. A (± )-Atenololból készített származék analízise két közel egyenlő intenzitású diasztereomer csúcsot mutat, míg a (-)-Atenololból készíteti származék esetében a két csúcs intenzitásának aránya 1,5 :98,5, ami 97,0%-os optikai tisztaságának felel meg, 10. példa (4-AÍlU-oxi-fenil)-acetamid átalakítása Pseudo-12 5 10 15 20 25 30 3.5 4G 45 50 55 60 65 7
