201296. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-szubsztituált-1-(alkil-amino)-2-propanolok sztereospecifikus előállítására
HU 201296 B 7 8 zó jelek burkoló görbéje (lásd l.a. ábra (a) és (b) jelzése) lefelé eltolódik, és mindegyikük két egyenlő intenzitású sávra hasad fel (lásd l.b. ábra (a) + (b)). A mikrobiológiailag előállított ( + )-glicidil-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]-éterben lévő geminális protonok mindegyikéből ugyanilyen körülmények között azonban csak egy jelgörbe észlelhető (lásd l.c. ábra (a) + (B). így mikrobiológiai epoxidálással kapott (+)-ghcidil-{4-(2-mctaxi-etil)-feniJ]-éter optikai tisztasága a protonmágneses rezonanciaspektroszkópiás mérések kísérleti hibáján belül 100%-nak vehető. 2. példa (+ )-Glicidil-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]-éter átalakítása (-)-metoprolollá. 290 mg ( + )-glicidil-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]éter (lásd 1. példa) 6,2 ml vízmentes etanollal és 1,84 ml izopropil-aminnal készített oldatát visszafolyató hűtő alatt 3 óra hosszat forraljuk, majd az oldószereket eldesztilláljuk. A kapott olajat 10 ml diklór-metánban oldjuk, és 10 ml 0,2 n sósavoldatba extraháljuk, amelyet utána 2 x 10 ml diklór-metánnal mosunk. A savas oldatot 3 ml 2 n nátrium-hidroxid oldattal meglúgosítjuk, és a terméket 10 ml diklór-metánba extraháljuk. A diklór-metános extraktumot nátrium-szulfáton szárítjuk, és az oldószer eldesztillálásával ragacsos szilárd anyaghoz jutunk. A terméket hexánból átkristályosftva 260 mg (-)-metaprololt kapunk, amelynek olvadáspontja 42-45 “C; [aj^D = -5,46* (c = 1,01; etanol). A kémiai úton előállított (± )-metaproíoI olvadáspontja 49-51 °C, és optikailag inaktív, amint várható. A (-)-metoprolol protonmágneses rezonanciaspektruma és tömegspektruma (2. és 3. ábrák) és a (± )-metoprolol hasonló adatai (itt nem mutatjuk be külön) egyeznek a kívánt szerkezettel, és megkülönböztethetetlenek a metoprolol-tartarát kereskedelmi mintából extrahált (± )-metoprolol (olvadáspont: 48,5-50,5 °C) protonmágneses rezonanciaspektrumtól. A (-)-metoprolol optikai tisztaságát S-leucildiasztereomer amid-származékának fordított fázisú nagyhatékonyságú foiyadékkromatogrfáfiás (HPLC) oszlopon [Lichrosorb RP8(10p,m), 25 cm x 1/4 (0,635 cm) külső átmérő, 4,9 cm belső átmérő, mozgó fázis: 40% acetonitril 3,0 pH-jú 0,1 mólos nátrium-foszfát pufferban, 2,5 ml/perc, U.V. detektálás] végzett elválasztásával határozzuk meg. A származékot úgy állítják elő, hogy metoprololt (terc-butoxi-karbonil)-S-leucin (BOC-S-leucin) szimmetrikus anhidridjével reagáltatunk, majd ezt követően a BOC-csoportot trifluor-ecetsawal eltávolítjuk, ahogy J- Hermansson és CJ. Von Bahr a J.Chrom., 227, 113 (1982)-ben leírják. A (+)-metoprololból készített hasonló minta analízise két egyenlő intenzitású csúcsot eredményez, amint ez racemát esetében várható. A (-)-metoprololból készített minta 97,7: 2^3 intenzitásarányú két csúcsot eredményezett, ami 95,4%-os optikai tisztaságnak felel meg. 3. példa Allil-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]-éter átalakítása 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 (+ )-glicidil-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]-éterré Pseudomonas aeruginosa NCIB 12036-tai, majd ezt követően ennek átalakítása (-)-metoproBá, Pseudomonas aeruginosa NCIB 12036 szuszpenziót készítünk úgy, hogy 0,75% nátrium-laktátot és 0,05% dietoxi-metánt tartalmazó ASM ásványi sós táptalajban 24 óráig 30 °C-on tenyésztett sejteket az eredeti sejttenyészet térfogata egytizedének megfelelő ASM táptalajban reszuszpendálunk. 1100 ml ilyen sejtszuszpenziót 3^3 g allil-[4-(2- metoxj-etil)-fenil]-éterrel 30 °C-on 220 ford./percnél inkubálunk. A reakdóelegyet 24 óra múlva 500 ml diklór-mctánnal extraháljuk, az extraktumot nátrium-szulfáton szárítjuk, és az oldószer ledesztillálása után 2,67 g olajat kapunk. Szjükagélen végzett tisztítás (lásd 1. példa) 930 mg (+)-gücidil-[4- (2-metoxi-etü)-fenil]-étert eredménye*; [a] <1 - + 8,21* (c=0,943; etanol). Az Eu(hfc)3 euröpium shift-reagens jelenlétében protonmágneses rezonanciapsektroszkópiával mért optikai tisztaság (lásd 1. példában) a protonmágneses rezonanciaspektrum mérések kísérleti hibáján belül 100%-nak bizonyul. 694 mg ( + )-glicidil-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]éterből (a 2. példában leírt módszer szerint) 579 mg (-)-metoprololt állítunk elő, amelynek olvadáspontja 44-46 °C;[ot]25D = -5,49* (c ^1*02; etanol). Az optikai tisztaság (a 2. példában leírt módszerrel meghatározva) 98%-nak bizonyul, Ázs^yalúg kristályosításával 113 mg (-)-metoprololt kapunk, amelynek optikai tisztasága 96%. 4. példa Allil-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]-éíer átalakítása Pseudomonas aeruginosa NCIB 8704-gyel ( + )-glicidil-[4-(2-mctoxi-etil)-fenil]-éterré, majd ennek átalakítása (-)-metoprolollá. 200 ml Pseudomonas aeruginosa NCIB 8704 sejtszuszpenziót (készítés a 3. példában, leírtak szerint) inkubálunk 2 g allil-[4-(2-metoxj-etil)-fenil}éterrel 30 °C-on 24 óráig, majd a szjuszpeuziót (a 3. példában leírtak szerint) extraháljuk, és tisztítjuk. Ilymódon 91 mg (+ )-giicidil-[4-(2-metpxi-etil)-fenü]-étert kapunk. Az epoxid Eu(hfc)? európium shift-reagens jelenlétében protonmágneses rezonanciaspektroszkópiával mért optikai tisztasága (lásd 1. példa) a protonmágneses rezooanciaspektroszkópiás mérések hibáin belül 100%-nak bizonyul. 76 mg ( + )-glicidil-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]éterből (a 2. példában leírt módszer felhasználásával) 55 mg (-)-mctoprololt állítunk elő, amelynek olvadáspontja 42-45 °C [aj^D = -4,93* (c = 0,944; etanol), S-leucil-diasztereomer származékának (a 2. példában leírtak szerint) nagyhatékonyságú folyadékkromatográfiával meghatározott optikai tisztasága 98,8%. Az anyalúg bepárlásával 17 mg 95,2% optikai tisztaságú (-)-metoprololt kapunk. 5. példa Alül-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]-étcr átalakítása Pseudomonas putida NCIB 9571-gyel ( + )-glicidil[4-(2-metoxi-etil)-fenil]-éterré, majd ennek átalakítása (-)-metoprolollá. 200 ml (a 3. példában leírtak szerint készített) 5
