201119. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kedarcidin és ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

1

HU 201119 B

2

A találmány tárgya eljárás a kedarcidin tumorellenes antibiotikum mikrobiológiai előállítására a Streptoalloteichus sp. nov. L-585-6 törzzsel. A találmány foglalkozik továbbá a kedarcidin antibiotikumot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállításával. Foglalkozik továbbá a leírás a kedarcidint termelő Streptoalloteichus sp. L-585-6 jelű, ATCC 53650 deponálási számú törzzsel.

A találmány szerinti tumorellenes kedarcidin jellemzői:

(a) megjelenés: barnássárga színű szilárd anyag;

(b) molekulatömeg: 12400 Dalton, SDS-poliakrilamid gél elektroforézissel meghatározva; 17000 gélszüréses/HPLC módszerrel meghatározva;

(c) UV spektrum: 2. ábra;

(d) izoelektromos pont: 3,65;

(e) a polipeptidrészének aminosavsorrendje: X-ala-ala- val-ser-val-ser-pro-ala-thr-gly-leu-ala-asp-gly-ala-thr-val-thr-val-ser-ala-ser-glyphe-ala-thr-ser-thr-ser-ala-thr-ala-leu-gln-cys-alaile-leu-ala-asp-gly-arg-gly-ala-cys-asn-val-ala-gluphe-his-asp-phe-ser-leu-ser-gly-gly-glu-gly-thr-thrser-val-val-val-arg-arg-ser-phe-thr-gly-tyr-val-met-pro-asp-gly-pro-glu-val-gly-ala-val--asp-cys-asp-thrala-pro-gly-gly-cys-gln-ile-val-val-gly-gly-asn-thrgly-glu-tyr-gly-asn-ala-ala-ile-ser-phe-gly-OH; ahol X jelentése H-ala-ser, H-ser vagy H.

A találmány szerinti antibiotikumot a fenti fizikai-kémiai tulajdonságai megkülönböztetik más, eddig ismert tumorellenes, peptidjellegü antibiotikumoktól, mint amilyen a neokazinosztatin, makromomicin, largomicin, aktinoxantin és az AN-7D.

A találmány tárgyául szolgáló mikrobiológiai kedarcidinelöállitás abból áll, hogy a fenti kedarcidin-termelö Streptoalloteichus törzset asszimilálható szénforrást és nitrogénforrást tartalmazó táptalajon tenyésztjük süllyesztett, aerob körülmények között és az antibiotikumot a fermentléból kinyerjük.

A találmány további tárgya a kedarcidin antibiotikum tumorgátló mennyiségét és gyógyászati szempontból alkalmazható vivöanyagot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítása.

A találmány szerint előállított antibiotikum alkalmas a tumornövekedés gátlására emlősöknél, oly módon, hogy a tumoros szervezetbe a kedarcidin antibiotikum tumorgátló mennyiségét juttatjuk be.

Az aminosavak jelölésére az alábbi rövidítéseket használjuk: thr: treonin

ser:

szerin

asp:

aszparaginsav

asn:

aszparagin

glu:

glutaminsav

gin:

glutamin

pro:

prolin

gly:

glicin

ala:

alanin

val:

valin

met:

metionin

ile:

izoleucin

leu:

leucin

tyr:

tirozin

phe:

fenilalanin

his:

hisztidin

iy:

lizin

arg:

arginin

cys:

cisztein

trp:

triptofán

Az L-586-6 törzset Indiában, a Maharasta államban gyűjtött talajmintából izoláltuk.

Az L-586-6 törzs leírása:

Alaktani sajátosságok:

Az L-586-6 Gram-pozitiv, szálas mikroorganizmus, mely szubsztrát- és légmicéliumokat fejleszt. A szubsztrátmicélium átszövi az agart és nem fragmentálódik. 5-25 pm átmérőjű gömb alakú hifaagregátumok figyelhetők meg az összeolvadt vegetativ hifák mentén.

A légmicéliumok jól elágazók, egy irányba meghajtó vagy spirálisan csavarodó hoszszú hifákat fejlesztenek, melyeken a spórák folyamatos vagy megtisztított láncokban fejlődnek. Főként az ISP5 táptalajon alakulnak ki az elágazó rövid spórafüzérekből tömött bojtok. Mindkét típusú spóra alakja az oválistól rövid hengeresig változik (0,4-0,6 x x 1,0-2,0 pm), mozgásra képtelen és a felszíne sima.

5-10 napos inkubáció után a légmicéliumon egyedül álló vagy tömegesen megjelenő színtelen gömb alakú testek jelennek meg (5- -20 pm átmérőjű). További három hetes vagy hosszabb inkubáció után ezek a gömb alakú testek sárgásbarna szklerótikus granulátumokká (40-100 pm átmérőjű) fejlődnek, melyeket megnyúlt léghifák borítanak.

Tenyészet:

A növekedés általában közepes, de a Czapek-féle szacharóz/nitrátos agaron, zablisztes agaron és keményítő/ásványi sós agaron nagyon gyenge. Tirozinos agaron és glicin/aszparaginos agaron légmicéliumokat fejleszt, viszont ISP 2, 3, 4, és 6 jelű agaron, valamint Bennett-féle agaron a légmicélium nem alakul ki. A légmicélium sárgás fehér színű. ISP6 és 7 jelű agaron feketés melanoid festék keletkezik. Más eltérő pigment nem keletkezik. Az L-586-6 törzs tenyészetének jellemzőit az I. táblázatban foglaljuk össze.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

3