201099. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 40926 antibiotikum mannozil-aglikon és ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
17 HU 201099 B 18 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás A 40926 antibiotikum mannozil-aglikon előállítására, mely a következő jellemzőkkel rendelkezik: A) UV abszorpciós spektruma a következő abszorpciós maximumokat mutatja: lambdaux(nm) a) 0,1 n HC1 b) pH 7,38 foszfát puffer c) 0,1 n káliumhidroxid d) pH 9,0 foszfát puffer 280 280; 300 (váll) 298 282; 300 (váll) B) IR abszorpciós spektruma a következő abszorpciós maximumokat mutatja (cm*1): 3700-3100; 3000-2800 (nujol); 1655; 1620- -1540; 1505; 1460; (nujol); 1375 (nujol); 1350-1250; 1210; 1150; 1020; 970; 850; 810 C) 1H-NMR spektruma a következő jel-csoportokat mutatja (ppm-ben) 270 MHz-en DMS0-d6-ban (hexadeutero-dimetil-szulfoxid és CFsCOOH elegyében felvéve, belső standardként (0,00 ppm) TMS-t alkalamazva (delta, ppm; multiplicitás; azonosítás); 2,51, s (DMSOds); 2,50, s (NCH3); 2,88, m (Z2); 3,30, m (Z’2); 4,08, m (X6); 4,44, d (X5); 4,49, d (X7); 4,83, m (X2); 5,02, s (4F); 5,08, s (Z6); 5,31, s (a mannóz anomer protonjai); 5,53, d (X4); 5,78, s (4B); 6,08, d (X3); 7,70, s (6B); 6,44-8,52 (aromás és peptid NH-k) D) retenciós idő (Rt) 1,18 az L 17054 (TA3-1) antibiotikumhoz viszonyítva (Rt = 8,78 perc), az elemzést fordított fázisú HPLC-vel a következő körülmények között végezve: oszlop: Ultrasphere ODS (5 pm) Altex 4,6 mm (belső átmérő) x 250 mm eló-oszlop: Brownlee Labs RP 18 (5 pm) A eluálószer: CHaCN 10% 2.5 g/1 NaHzPOí.HíO 90% pH 6,0-ra beállítva B eluálószer: CH3CN 70% 2.5 g/1 NaH2P04.Hz0 30% pH 6,0-ra beállítva eluálás: lineáris grádiens (5%-60% B eluálószer A eluálószerben), 40 perc alatt áramlási sebesség: 1,6 ml/perc UV detektor: 254 nm belső standard: L 17054 (TA3-1) antibiotikum E) Rf 0,39 a következő kromatográfiás rendszerben: 5 g/1 NaHzP04.Hz0-t tartalmazó 1 mólos NaCl 70 5 acetonitril 30 pH 6,0-ra beállítva, szilanizált szilikagél 60 F254 Merck lemezeket (rétegvastagság 0,25 mm) - alkalmazva Előhívás: 10 - UV fény- sárga szín Pauly reagenssel, azaz diazotált szulfanilsavval- bioautografia B. subtilis ATCC 6633 felhasználásával minimális Davis-f táptalajon 15 F) gyors atom-bombázásos (FAB) tömegspektrum M + M* értékkel kb. 1374-nél, azzal jellemezve, hogy az A 40926 antibiotikum komplexet, az A és B faktorban feldúsított 20 komplexet, vagy a PA, PB, A, B vagy Bo faktort egy ásványi sav vagy egy erős szerves sav tömény vizes oldatának alkalmazásával - kívánt esetben egy aprotikus szerves oldószer jelenlétében - hidrolizál-25 juk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy ásványi savként kénsavat alkalmazunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal 30 jellemezve, hogy szerves savként trifluor-ecetsavat alkalmazunk. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy aprotikus szerves oldószerként dioxánt alkalmazunk. 35 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a reakcióelegy hőmérsékletét 0 °C és a visszafolyatási hőmérséklet között tartjuk. 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal 40 jellemezve, hogy a reakcióelegy hőmérsékletét 15 °C és 75 °C között tartjuk. 7. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy erős savként 85-95%-os vises trifluor-ecetsavat alkalmazunk és a reak-45 úóelegy hőmérsékletét a szobahőmérsékletre állítjuk be. 8. Az 1. igénypont szerinti eljáráB, azzal jellemezve, hogy a hidrolízist 2:1 - 1:2 arányú vizes In kénsav:dioxán elegy jelenlété-50 ben hajtjuk végre. 9. Eljárás gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti eljárással előállított A 40926 antibiotikum mannozil-aglikon vegyületet egy 55 gyógyászati szempontból elfogadható vivőanyaggal és/vagy adalékanyaggal összekeverve gyógyszerkészítménnyé feldolgozzuk. Kiadja az Országos Találmányi Hivatal, Budapest - - A kiadásért felel: dr. Szvoboda Gabriella osztályvezető R 4960 - KJK 90.3346.66-13-2 Alföldi Nyomda Debrecen - Felelős vezető: Szabó Viktor vezérigazgató 11
