201096. lajstromszámú szabadalom • Eljárás inzulin-származékok kristályszuszpenziójának és az ezt tartalmazó gyógyszerkészítményeknek az előállítására
7 HU 201096 B 8 idő (óra) 0 12 4 6 vércukorszint (%) 100 51 44 69 83 3. példa Sertés inzulinból félszintetikus úton pl. a 31 01 382 sz. NSZK közrebocsátási irat szerinti módon előállított kristályos humán inzulin-ArgB31-LysB32-OCH3 szuszpenzió 50% Isophan-protamin-humán-inzulinkristályokkal keverve 100 egység/ml formájában. 10 ml teljes térfogatra vízzel feloldunk: humán inzulin-ArgB31-LysB32-OCH3 (27,0 NE/mg, cinkmentes) 37,0 mg cink-klorid 0,6 mg nátrium-dihidrogén-foszfát-dihidrát 21,0 mg m-krezol 15,0 mg fenol 6,0 mg glicerin 160,0 mg A pH-t 1 n sósavval, illetve 1 n natrium-hidroxiddal 7,4-re állítjuk be. Az edényt szobahőmérsékleten enyhén keverjük, igy egy napon belül prizma formájú kristályok képződnek. Külön állítunk elő Isophan-humán-inzulin kristályokat (NPH) úgy, hogy vízben elegyítünk: humán inzulin (28,0 NE/mg) 35,7 mg protamin-szulfát 3,2 mg nátrium-dihidrogén-foszfát-dihidrát 21,0 mg m-krezol 15,0 mg fenol 6,0 mg glicerin 160,0 mg A pH-t 1 n sósavval, illetve 1 n nátrium-hidroxiddal 7,4-re állítjuk be, és a teljes térfogatot vízzel 10 ml-re állítjuk be. Az elegyet enyhén keverjük, így tipikus pálcika formájú NPH-kristályok képződnek. A két szuszpenziót összesítjük, így 100 NE/ml kevert készítményt kapunk, amely az állatkísérletekben erősen lassított hatást mutat. 4. példa 75%, géntechnológiai úton nyert preproinzulinból tripszines hasítással előállított kristályos humán inzulin-ArgB3l-ArgB32-OH-ból és 25% oldott humán inzulinból álló, 40 NE/ml koncentrációjú depó-készítmény 250 ml hígított sósavban feloldunk: 1,111 g humán inzulin-ArgB31-ArgB32-OH-t (27,0 NE/mg) úgy, hogy a pH=4 legyen. Ezt az oldatot alkalmas módszerrel sterilre szüljük. Külön feloldunk vízben: nátrium-dihidrogén-foszfát-dihidrát 1,575 g m-krezol 1,125 g fenol 0,450 g glicerin 14,118 g A pH-t nátrium-hidroxiddal 7,5-re állítjuk be, és a térfogatot vízzel 0,5 1-re egészítjük ki. Ezt a pufferoldatot szintén sterilre szűrjük. Aszeptikus körülmények között összekeverjük a két oldatot, és addig keverjük, míg homogén, kb. 10 pm méretű kristályok nem képződnek (A). Inzulinoldatot (B) készítünk úgy, hogy összekeverünk: humán inzulin (28,0 NE/mg) 0,357 g nátrium-dihidrogén-foszfát-dihidrát 0,525 g m-krezol 0,375 g fenol 0,150 g glicerin 4,706 g A kapott oldat pH-ját hígított nátrium-hidroxiddal 7,3-ra állítjuk be, és térfogatát 0,25 1-re egészítjük ki vízzel. Az oldatot sterilre szűrjük. Aszeptikus körülmények között a (B) oldatot hozzáadjuk az (A) kristályszuszpenzióhoz, és a készítményt olyan flakonokba töltjük, amelyekből többszöri kivétel lehetséges. Az ilyen depó-készitmény alkalmas a diabetes mellitus kezelésére. 5 10 15 20 25 30 35 40 6
