201094. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunstimuláns acil-tripeptidek és az azokat hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
13 HU 201094 B 14 kentett nyomáson megszáritjuk. Ily módon színtelen, szemcsés szilárd anyag formájában 5,78 g (hozam: 74%) cím szerinti vegyületet kapunk. ‘H-NMR-spektrum (CDaOD): multiplettek: delta: 0,9 és 1,2-1,7 [13H, CH3(CHz)í- és glutamil C-3 metilén]; 1,35 (3H, d, alanin CHa-); 3,67 (3H, s, -CO2CH3), 4,3-4,5 (4H, átfedő multiplettek, -CONH-Cff-CO-), multipettek 5,1 (2H) és 5,17 (4H), benzil -CH2-; 7,34 (15H, in, aromás). 6. példa tfi-[Heptanoil-gamma-D-glutamil-ß-(L)-aszpartil-cC-D-alanin-metil-észter]-D-2,3-diamino--propionsav 0,83 g (0,97 mmól) N3-[heptanoil-gamma- D-glutamil-oC-benzil-észter-/3-(L)-aszpartil-oC-D-alanin-metil-észter]-N*-benziloxi-karbonil-D-2,3-diamino-propionsav-benzil-észter 280 ml etanollal készült oldatát egy Parr-féle készülékben, 1,3 g Pearlman-féle katalizátor (csontszenes palládium-hidroxid, amelynek palládium-hidroxid-tartalma: 20%, és víztartalma: körülbelül 31%) jelenlétében, 3,5 • 105 Pa nyomáson 55 órán át hidrogénezzük. Utána a katalizátort kiszűrjük, és a szűrletról az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. Ily módon színtelen, amorf szilárd anyag formájában 374 mg (hozam: 71%) cím szerinti vegyületet kapunk. A termék vékonyréteg-kromatográfiás Rf-értéke=0,49 (szilikagél lemezen, eluens: ecetsav, etil-acetát, víz és n-butanol 1:1:1:1 arányú elegye, a lemezeket úgy hívjuk elő, hogy 10%-os etanolos foszfor-molibdénsav-oldattal befújjuk, majd megmelegitjük azokat). m-NMR-spektrum (DMSO-d6), delta: 0,86 (3H, m) és 1,05-1,86 (16H, átfedő multiplett-sorozat, CH3(CH2>4-, glutamil C-3 metilén-protonok, alanin CHa), 2,06-2,33 (4H, m, heptanoil C-2 és glutamil C-4 metilén-protonok), 2,35-2,67 (2H, m, aszpartil metilén-protonok), 3,1-3,8 (2H, széles m, metilén-protonok, diamino-propionsav), 3,62 (3H, s,-CO2CH3), két átfedő multiplett 4,06-4,35 (2H) és 4,5 (1H, m), aminosav metil-protonok. 7. példa lß-[Heptanoil-gamma-D-glutami}-ß-(L)-aszpar-til-c(-D-alanin]-D-2,3-diamino-propionsav~trinétriumsó 2,00 g (3,7 mmól) N3-[heptanoil-gamma-D-glutamil-/ä-(L)-aszpartil-oC-D-alanin-metil-észter]-D-2,3-diamino-propionsav, 8,3 ml víz és 25 ml aceton elegyével készült oldatához jeges fürdőben egyszerre hozzáadunk 10,923 ml (10,9 mmól) 1,00 normál nátrium-hidroxid-oldatot. Ezután a jeges fürdőt eltávolítjuk, és az elegyet másfél órán át szobahőmérsékleten keverjük. Az acetont forgó rendszerű desztilláló készülékben ledesztilláljuk, és a maradék vizes oldatot fagyasztva szárítjuk. Ily módon amorf, színtelen szilárd anyag formájában 2,14 g (hozam: 97%) cim szerinti vegyületet kapunk. A termék vékonyréteg-kromatográfiás Rf-értéke=0,46 (szilikagél lemezen, eluens: ecetsav, etil-acetét, n-butanol és viz 1:1:1:1 arányú elegye, a lemezeket úgy hívjuk elő, hogy 10%-os etanolos foszfor-molibdénsav-oldattal befújjuk, majd megmelegítjük azokat). 13-C-NMR-spektrum (D2O), ppm: 180,6, 179,8, 178,5, 176,8, 175,8, 172,3, 171,8, 55,98, 54,95, 51,42, 51,16. 8. példa tP-[Heptanoil-gamma-D-glu tamil-cC-benzil-észter-B-(L)-aszpartil-oC-D-alanin-metil-észter]-4-( tercier- b u toxi-karbonil-amino)-4-metoxi-karbonil-piperidin 1,00 g (3,87 mmól) 4-(tercier-butoxi-karbonil-amino)-4-metoxi-karbonil-piperidin 300 ml vízmentes diklór-metánnal készült oldatához jeges hűtés közben hozzáadunk először 1,90 g (3,46 mmól) heptanoil-gamma-D-glutamil-oC-benzil-észter-oC-(L)-aszpartil-D-alanin-metil-észtert, utána 0,52 g (3,58 mmól) 1-hidroxi-benzotriazolt, és ezután 1,44 g (4,06 mmól) l-ciklohexil-3-(2-morfolino-etil)-karbodiimid-meto-p-toluol-szulfonátot. A reakcióelegyet 18 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd 1 normál, vizes nátrium-hidroxid-oldat azonos térfogatú részleteivel kétszer, majd 1 normál, vizes sósav, víz és végül telített nátrium-klorid-oldat azonos térfogatú részleteivel egyszer kimossuk. Az elválasztott szerves részt vízmentes nátrium-szulfáton megszáritjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. Ily módon színtelen, szilárd anyag formájában 1,94 g nyersterméket kapunk. Ezt a nyersterméket egyesitjük egy hússzor kisebb méretben, tájékozódás céljából ugyanilyen módon elvégzett kísérlet 93 mg súlyú nyerstermékével, és az egyesített nyerstermékeket egy 150 g, 32-62 mesh szemcseméretű szilikagéllel töltött oszlopon kromatografáljuk, eluensként etil-acetát és metanol 98:2 arányú elegyét használjuk. A kromatografálást vékonyréteg-kromatográfiás módszerrel követjük, mégpedig szilikagél lemezeken, eluensként etil-acetát és metanol 98:2 arányú elegyét használjuk, és a lemezeket úgy hívjuk elő, hogy 10%-os etanolos foszfor-molibdénsav-oldattal befújjuk, majd megmelegitjük 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
