201093. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szomatotropin szolubilizálására és kinyerésére
3 HU 201093 B A .begöngyólés" a fehérje általános konformációs alakjának visszaállítását jelenti olyan mértékben, amely elegendő a megfelelő oxidációhoz. A .begöngyólés "-t a karbamid denaturáló hatásának csökkentésével hajtjuk 5 végre olyan módon, hogy a karbamid-koncentrációt a megfelelő szintre állítjuk be, ha szükséges, hogy lehetővé tegyük a fehérje aminosav-szekvenciájának kölcsönhatásba lépését, hogy felvegye nativ szekunder és io tercier szerkezetét. Az .oxidáció" kifejezés intramolekuláris diszulfidkőtések képződésére vonatkozik, hogy stabil, nativ konformációt nyerjünk a biológiai aktivitás biztosítása érdekében. 15 Az .enyhe oxidáló ágens' olyan szert jelent, amely elősegíti a szulfhidril-csoportok oxidációját, ezáltal az intramolekuláris diszulfid-hidak képződését, miközben nem oxidálja az oxidálásnak kitett fehérje más szubsztitu- 20 ens csoportjait. Bár enyhe oxidáló ágenseket, mint pl. hidrogén-peroxidot is alkalmazhatunk, a levegőnek való kitevés egészen elfogadható és előnyös megoldás. A .biológiai aktivitás" azt jelenti, hogy 25 a szomatotropin képes a kívánt in vivo fiziológiai válasz létrehozására. A biológiai aktivitást a megfelelő fajban végzett in vivo vizsgálat nélkül megfelelő biológiai meghatározásokat végezve határozzuk meg. A találmány- 30 ban foglalt szomatotropinokhoz megfelelő biológiai meghatározás (bioassay) a .patkány súlygyarapodás biológiai meghatározás". Ebben a biológiai meghatározásban a szomatotropin készítmények bioaktivitásét ismert ké- 35 szitményekkel (pl. extrahált nativ szomatotropin) viszonyítva vesszük fel, hipofízisirtott patkányok súlygyarapodásának mennyiségét összevetve a beadott készítmény különböző mennyiségével. 40 A szomatotropinok olyan hormonok, amelyeket az adeno-hipofizis (az agyfüggelék első lebenye) választ ki, és amelyekről ismert, hogy hatnak a csontváz növekedési sebességére és a testsúlygyarapodásra. A szomatot- 45 ropin beadásáról kimutatták, hogy növekedést idéz elő a tejtermelésben tejelő állatokban, mint a tejelő tehenek és kecskék. Tipikusan a szomatotropinok mintegy 191 aminosav-gyököt tartalmaznak, és molekulasúlyuk hozzávetőlegesen 22000 dalton. Néhány fajból származó szomatotropinoknál a teljes aminosav-szekvenciát megállapították, beleértve az embert és bizonyos állatokat, pl. madarakat (avian), juhokat (ovin), sertéseket (porcin) és szarvasmarhákat (bovin). A fentebb felsorolt fajokból származó aminosav-szekvenciák összehasonlítása viszonylag nagy általános homológiét jelez, amikor a .konzervatív" aminosav-helyettesítéseket tekintjük át. Általában bizonyos .konzervatív" helyettesítések végbemehetnek jelentős változások nélkül egy fehérje durvább kémiai tulajdonságaiban. Az ilyen helyettesítésekre példa egy alifás, hidrofób gyök helyettesitése egy másikkal (izoleucin, valin, leucin és metionin), és a poláros gyökök helyettesitése egy másikkal (arginin lizint, glutamin aszparagint és glutaminsav aszparaginsavat). Ellenkező töltésű ionos gyökökről kimutatták, hogy helyettesíthetik egymást, pl. az aszparaginsav vagy glutaminsav helyettesítheti a lizint. Ezen túl .radikális helyettesítések" (különböző fajtájú oldalláncot képviselők) is megtörténhetnek lényeges változások nélkül a működésben vagy a kémiai tulajdonságokban, amikor a helyettesítés helyzete nem kritikus a konformáció szempontjából, és a helyettesítés mértéke nem kiterjedt. Az alábbi 1. táblázatban bemutatjuk a különböző állatfajokból származó Bzomatotropinok közölt primer konfigurációját. Az 1. táblázatban a következő rövidítéseket alkalmazzuk.: BGH (bovin szomatotropin); PGH (porcin, vagyis sertés szomatotropin): OGH (ovin, vagyis juh szomatotropin); ÁGH (avian, pl. baromfi szomatotropin); HGH (humán szomatotropin). Az .X" jel üres helyet jelöl a szekvenciában, ez csak azért van beiktatva, hogy demonstrálja a szóban forgó szomatotropinok sorbaállítását. Egy-egy szóban forgó szekvenciában a származásnál ezt a beiktatást nem vesszük figyelembe. így pl. a BGH 126. helyénél Leu szerepel (vagy Val, mint pl. a 10. példában alkalmazott alléi variációnál). 4 4
