201090. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dideoxicitidin-származékok és azokat hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
3 HU 201090 B 4 szaggatott vonal helyén további kötést nem tartalmazó (I) általános képletű vegyületté alakíthatjuk. Egy 5’-hidroxi-észter, N-amid-vegyületet ammóniás-vizes-meturiollal vagy metanolos-vizes-trietilaminnal kezelve az 5’-hidroxi-észter-származék és az N-ainid-származék hozzávetőlegesen ekvivalens mennyiségét nyerjük. Az (1) általános képletű vegyületek - mint már említettük - az ismert nukleotid származékoknál nagyobb stabilitást és lipofilicitást mutatnak. Az I. táblázatban az (I) ál- 5 talános képletű vegyületek néhány képviselőjének mért megoszlási hányadosát közöljük; az eredmények a vegyületek lipofilicitását igazolják. I. táblázat n-oktanol és foszfát puffer (pH 7,4 )x közötti látszólagos megoszlási hányados Tesztvegyület Megoszlási hányados N-acetil-2’,3’-didehidro-2’,3’-dideoxi-citidin-5’-acetát 0,39 N-acetil-2’,3’-dideoxi-citidin-5’-acetát 0,62 N-acetil-2’,3'-dideoxi-citidin 0,22 2’,3’-dideoxi-citidin-5’-acetát 0,14 N-propanoil-2’,3’-dideoxi-citidin-5-propanoát 6,8 N-propanoil-2’,3'-dideoxi-citidin 0,83 N-(2-metil-propanoil)-2’,3’-dideoxi-citidin-5’-(2-metil-propanoát) 58,0 N-(2-metil-propanoil)-2’,3’-dideoxi-citidin 2,38 N-butanoil-2’,3’-dideoxi-citidin-5’-butanoát 70,0 N-butanoil-2’,3’-dideoxi-citidin 2,67 N-palmitoil-2’,3’-dideoxi-citidin-5’-palmitoát >1000 N-benzoil-2’,3’-dideoxi-citidin 15,0 2’,3’-didehidro-2’,3’-dideoxi-citidin 0,03 2’,3’-dideoxi-citidin 0,05 x A n-oktanol és pH 7,4 értékű vizes foszfát puffer (emberi vér pH-ja) közötti látszólagos megoszlási hányadost Hansch és tsai klasszikus módszere szerint [Chem. Rév. 71, 525 (1971)] határozzuk meg. ^0 Az (I) általános képletű vegyületek metanol/viz elegyben vagy emberi vér plazmában mutatott stabilitását az alábbiak szerint határozzuk meg: Az alábbi vegyületek humán plazmában mutatott stabilitását mérjük: Tesztvegyület N- propanoil- 2 ’, 3 ’- d i d eoxi-Sorszám-citidin-5’-propanoát N- (2-metil-propanoil )-2’,3,-dideoxi-citidin-5’la -(2-metil-propanoát) N-butanoil-2’,3’-dideoxilb-5'-butanoát le N-propanoil-2’,3’-dideoxi-citidin N-(2-metil-propanoil)-2’,3’-2a-dideoxi-citidin 2b N-butanoil-2’,3’-dideoxi-citidin 2c 2’,3'-dideoxi-citidin 4 Először a minták vizsgálatához szükséges HPLC körülményeket (fordított fázisú C-18 oszlopon; metanol és pH 6,8-ra beállított 65 0,0001 mólos nátrium-foszfát változó arányú oldószerelegyeit) határozzuk meg. Minden mintára meghatározzuk az UV max értéket valamint a csúcs-stabilitást metanol: viz elegyben. Ezután a humán plazmában mórt stablilitást határozzuk meg. A kísérletben humán plazmát alkalmazunk; a betegtől levett plazmát felhasználásig fagyasztva tároljuk. A kísérlet során alkalmazott HPLC-berendezés gradiens rendszer, amely Gradient Master 1601 modellből, Constametric I szivattyúból és Constametric III szivattyúból áll. Egy LDC Spektrometer III detektort és Waters Wisp autoinjektort alkalmazunk. A kezdeti kísérleti vizsgálatokat Hewlett-Packard 1040A Diode-Array detektor segítségével végezzük el. Az összes minta vizsgálatához ODS-3 RAC II, 5m. 15 cm, 4,00 mm ID (WHATMANN, Clifton, N.J.) oszlopot alkalmazunk. Az oldószer-rendszer metanol és 0,001 mólos nátrium-dihidrogén-foszfát (pH 6,8) alábbi arányú elegyeiböl áll: lb, 2b - 50:50; la, 2a - 43:57; le, 2c - 50:50. Minden tesztvegyületet 15 ml-es kónikus kémcsőbe mérünk be és dimetil-szulfoxidban oldva 10 mg/ml töménységű törzsoldatot készítünk. A standard görbe elkészítéséhez a 4
