201072. lajstromszámú szabadalom • Eljárás racém folinsav szétválasztására frakcionált kristályosítással
1 HU 201072 B 2 A találmány tárgya eljárás (6S)-folinsav illetve alkálifém- és alkáliföldfém- sói, különösen kalcium-, magnézium-, kálium- és nátrium-folinátok előállítására. A folinsav az N-[5-formil-(6RS)-5,6,7,8- -tetrahidro-pteroill-L-glutaminsav, röviditve 5-CHO-(6RS )-H4-PteGlu. Az N-[5-formil-(6S >-5,6,7,8-tetrahidro-pteroil]-L-glutaminsav a Citrovorum-faktor, a Leuconostoc citrovorum növekedési faktora. A folinsav két aszimmetriacentrumot tartalmaz. A folinsavban a folsavból (N-pteroil-L-glutaminsavból) való előállításának megfelelően a glutaminsav-maradékban lévő optikailag aktiv szénatom L-formában van, míg a pteroil-maradék 5,6-os helyzetében lévő kettőskötés hidrogénezésével kialakított, 6-os helyzetben lévő optikailag aktiv szénatom racém, (6RS )-formóban van. A szintetikus folinsav (más néven leucovorin) ennek megfelelően két diasztereomer 1 : 1 arányú elegyéböl áll... A leucovorin gyógyszerkészítmények hatóanyagaként megaloblasztos folsavhiányos anémia kezelésére használható, antidótumként, a folsav-antagonista vegyületek, különösen az aminopterin és metotrexát szervezet általi elviselhetőségének fokozására a daganat-terápiában (leucovorin rescue), továbbá autoimmun-betegségek, például psoriasis vagy reumás arthritis kezelésére, ezenkívül bizonyos parazitaellenes szerek, például trimetoprim-szulfametoxazol elviselhetőségének fokozására használható a kemoterápiában. Természetes előfordulási helyén - például a májban - a folinsav csak S-formában található. A leucovorin biokémiai hatása - mint folsav-kofaktor - annak 5-CHO-(6S)-H4PteGlu-tartalmán alapul. Az inverz R-forma (az 5-CHO-(6R)-H4PteGlu] ezzel szemben alig metabolizálódik, és a vizelettel lassan kiürül. Ez utóbbi vegyület biológiailag hatástalan [J. A. Straw és munkatársai: Cancer Research 44, 3114 (1984)]. Ezért számos erőfeszítés történt az 5- -formil-(6SRJ-5,6,7,8-tetrahidro-pte roil-L-glutaminsav szétválasztására és az 5-formil-(6S)-5,6,7,8-tetrahidro-pteroil-L-glutaminsav aszimmetrikus szintézisére és a fiziológiailag aktív forma izolálására. D. Cosulich és munkatársai megkísérelték a szétválasztást az 5-formíl-(6RS)-5,6,7,8- -tetrahidro-pteroil-L-glutaminsav alkáliföldfém-sójának, például kalcium- vagy stronciumsójának vizes oldatból való frakcionált kristályosításával végrehajtani [J. Amer. Chem. Soc. 74, 4215-4216 (1952); 2 688 018 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás]. A B. Cosulich és munkatársai által ismertetett körülmények között azonban a kívánt szétválasztás nem valósítható meg. Az 5-formil-(6RS)—5,6,7,8-tetrahidro-pteroil-L-ghitaminsav kalciumsójának kristályosításakor például vízből, pH 7-8 értéken mindig újra tiszta 6RS-formát kapunk, amelyet királis HPLC-oszlopon kromatográfiás analízissel, valamint az optikai forgatás segítségével kvantitative kimutathatunk. Emellett lényegtelen, hogy a kristályosításra az 5-CH0- -(6RS l-HíPteGlu kalciumsóját tiszta vagy nyers formában használjuk-e, mindig az optikailag tiszta (6RS)-formát kapjuk vissza. Akkor sem érhető el a (6S)-forma elválasztása és feldúsitása, ha az alkáliföldfém-(6RS)-folinát túltelített vizes oldatát autentikus alkáliföldfém-(6S)-folináttal beoltjuk. Így ezidáig az N-[5-formil-(6S)-5,6,7,8- -tetrahidro-pteroil]-L-glutaminsav előállításának egyetlen módja az aszimmetrikus szintézis volt. A (6S)-folinsav aszimmetrikus szintézisére eddig ismert eljárások azonban ipari méretben nem alkalmasak a fenti vegyület előállítására. Napjainkig nem ismeretes ipari méretekben alkalmazható eljárás a (6S)-folinsav előállítására. Ezért célunk olyan eljárás kidolgozása volt, amely egyszerű, iparilag alkalmazható és gazdaságos módszert jelent a (6S)-folinsav és sói előállítására. Meglepő módon azt tapasztaltuk, hogy a (6RS)-folinsav alkáliföldfémsóinak - például kalcium-, magnézium- vagy stroncium-N-[5- -formil-(6RS )-5,6,7,8-tetrahidro-pteroil]-L-glutaminátnak |alkálifóldfém-(6RS)-folinétnak] előnyösen vizból való átkristályositásakor szervetlen vagy szerves bázis jelenlétében, lúgos közegben először túlnyomórészt a (6S)-forma kristályosodik ki, a kristályos termékben a (6S)-forma 85%, vagy annál nagyobb mennyiségben van jelen. A magas (6S)-forma-tartalmú, (6S)-formában erősen feldúsúlt. alkáliföldfém-folinát adott esetben további átkristályositással, előnyösen vízből, közel semleges pH-értéken végzett átkristályositással optikailag tiszta alkáliföldféut-(6SWolináttá alakitható. A kristályosításnál a hozam alkáliföldfém-ionok, például kalcium-, magnéziumvagy stroncium-kloríd hozzáadásával növelhető. A találmány tárgya tehát eljárás (6S)-folinsav és sói előállítására a (6R,S)-folinsav alkáliföldfémsóinak kristályositásával, és kívánt esetben az alkálifőldfém-folinátokból a sav felszabadításával és/vagy kívánt esetben alkálifémsóvá alakításával, amely eljárás jellemzője, hogy a kristályosítást egy bázis jelenlétében végezzük. A találmány tárgya továbbá egy olyan eljárás, amelynek során a kapott kristályokat egy bázis jelenlétében, vagy közelítőleg semleges pH-értéken legalább még egyszer átkristályosítjuk. Egy előnyös megvalósítási mód szerint az átkristályositást további alkáliföldfém-ionok jelenlétében végezzük. Ez eljárás kiindulási anyagaként mind tiszta, mind nyers alkáliföldfém-(6R,S)-folinát alkalmazható. A találmány tárgya tehát eljárás (6S)-folinsav és sói előállítására a (6RS)-folinsav 3 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
