201024. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aromatáz gátló hatású 4(5)-imidazol-származékok előállítására
HU 201024 B tűk, amely ebben az enzimben gazdag. A mikroszóma frakciót (100000 x g csapadék) centrifugálással készítettük. Az enzimkészítményt további tisztítás nélkül alkalmaztuk. A vizsgálati vegyületeket 100000 dpm l,2(1 * 3H]-androsztén-3,17-dionnal és NADPH-fejlesztő rendszerrel együtt adagoltuk. A vizsgált vegyületek koncentrációja 0,001; 0,01; 0,1 és 1,0 mM volt. Az inkubálást 37 °C hőmérsékleten 40 percig folytattuk. Az aromatizálás során az l.^TíJ-auádrosztén-S, 17-dion ^20-1 termel. A tríciumozott vizet és a tríciumozott szubsztrátot könnyel elválasztottuk Sep-Pak minioszlopon, ez a szteroidokat abszorbeálja, de a víz eluálható róla. A radioaktivitást folyadékszdntilláló számolóval számoltuk. Az aromatáz-gátló h^tás kiértékelésénél az inhibitorral kezelt minták 3H20-radioaktivitását hasonlítottuk össze az inhibitort nem tartalmazó kontroll radioaktivitásával. Kiszámítottuk az IC-10, az IC-50 és az IC-90 értéket, mint olyan koncentrációkat, amelyek az enzimaktivitást 10%kal, 50%-kal és 90%-kal csökkentették. Ezeket a koncentráció-értékeket a 2. táblázatban adjuk meg. A találmány szerinti vegyületek napi adagja mintegy 20- mintegy 200 mg. A találmány szerint előállított imidazolszármazékok toxicitását patkányoknál vizsgáltuk. Hatóanyagonként 5 nősténypatkányt alkalmaztunk, az adagolást 8 napon át folytattuk. Az adagolási mennyiség 10 mg/kg/nap volt orálisan. A vizsgált vegyületek a következők: 4-(3,3-difenil-propén-2- il)-lH-imidazol, 4-(3,3-difenií-propil)-lH-imidazol, 4-[33-bisz(2-metil-fenil)-propil]-lH-imidazoL, l-benzil-5-(33-difeml-propil)-lH-imidazol és 1- benzil-5-(3,3-difenil-propén-2-il)-lH-imidazol. Naponta vizsgáltuk az állatok viselkedését, külső megjelenését és mortalitását. Az állatokat az adagolási periódust megelőzően és ezután is lemértük. A szerveket boncolás után makroszkopikusan vizsgáltuk. A májat, a méhet és a petefészket lemértük. Mortalitás nem volt megfigyelhető. Az állatok tömeggyarapodása minden csoportban megfelelő volt. Azoknál a csoportoknál, amelynek tagjait 4- (3,3-difenil-2-propén-l-il)-lH-imidazoIlaI és 1- benzil-5-(3,3-difenil-2-propén-l-il)-lH-imidazoll al kezeltük, enyhe szőrmerevedés volt megfigyelhető valószínűleg a hatóanyag farmakológiai hatása következtében. A szervekben a hatóanyagnak tulajdonítható elváltozásokat nem tapasztaltunk. Ennek megfelelően minden vizsgált vegyület elviselhető. A következő példákkal találmányunkat mutatjuk be. 1. példa 4-(3,3-Difenil-3-Iiidroxi-propil)-lH-imidazol a) l-(l-Benzü-imidazol-5-il)-akrilsav Lombikba beviszünk 18,6 g l-benzil-imidazol-5-karbaldehidet, 10,4 g malonsavat és 4,8 ml piridint. A reakcióelegyet vízfürdőn 16 órán át forraljuk. A kapott reakcióelegyet lehűtjük, és vízzel hígítjuk. A kiváló csapadékot szűrjük és vízzel mossuk. Így 15 g cím szerinti terméket kapunk, op.: 221-226 °C. ^-NMR: 5,15 (s, 1H), 5,64 (s, 2H), 6,58 (d, 1H), 73-7,5 (m, 5H), 7,61 (d, 1H), 8,08 (s, 1H), 9,07 (s, 1H). b) 4(5)-Imidazol-propu>nsav-etil-észter 7 l-benzil-5-imidazol-akrilsavat (15 g) feloldunk 50 ml 4 n sósav-oldatban. A reakdóelegyhez hozzáadunk mintegy 60 mg 10%-os, szénre felvitt palládiumot, és a reakcióelegyet erélyesen keveijük hidrogénlégkörben mintegy 85 °C hőmérsékleten, míg további hidrogén-fogyasztás már nem lép fel. A kapott reakcióelegyet szűrjük, és szárazra pároljuk. A visszamaradó anyagot feloldjuk 50 ml abszolút etanolban, és száraz hidrogén-klorid-gázt vezetünk át az oldaton 4 órán át, és ezalatt a reakcióelegyet keverés és visszafolyatás közben forraljuk. A kapott reakcióelegyet bepároljuk, Így olajos terméket kapunk, ez a nyers tennék, és így használjuk el a következő Grignard-reakdóban. \H-NMR:1,237 (t, 3H), 2,656 (t, 2H), 2,936 (t, 2H), 4,137 (q, 2H), 6,804 (s, 1H), 7359 (s, 1H). c) 4-(33-Difenil-3-hidroxi-propil)-lH-imidazol 33 g magnéziumforgácsot leöntünk 100 ml száraz tetrahidrofuránnal. A reakdóelegyhez hozzácsepegtetjük 21,8 g bróm-benzolnak 30 ml száraz tetrahidrofuránban készített oldatát olyan sebességgel, hogy a reakció egyenletesen menjen végbe. Az adagolás befejezése után a reakdóelegyet további 1 órán át visszafolyatás közben forraljuk, és lehűtjük szobahőmérsékletre. Az így kapott reakcióelegyhez hozzácsepegtetjük 4(5)-imidazol-propionsav-etil-észtemek (7,8 g) 50 ml tetrahidrofuránban készített oldatát szobahőmérsékleten. Az adagolás befejezése után a reakdóelegyet egy további órán át keveijük 40-50 °C hőmérsékleten. Az így kapott reakdóelegyet lehűtjük, és hideg vízbe öntjük. A tetrahidrofuránt lepároljuk, és a kapott oldathoz tömény sósav-oldatot (20 ml) adunk. Az így kapott oldatot lehűtjük, és a kiváló csapadékot, amely a terméket hidroklorid-sója formájában tartalmazza, szűréssel elválasztjuk, mossuk és szárítjuk. Kitermelés 11,2 g, op.: 189-191 °C. 1H-NMR:2,703 (s, 4H), 4,758 (s, 3H), 7,214- 7,429 (m, 11H), 8,457 (s, 1H). Hasonló módon folytatunk le Grignard-reakciót 4(5)-imidazol-propionsav-etil-észterreI és a megfelelően helyettesített bróm-benzollal, és így további találmány szerinti vegyületeket állítunk elő. így a következő vegyületeket állítjuk elő: 4-[3,3-bisz(4-klór-fenil)-3-hidroxi-propil]-lH- imidazol, a hidroklorid olvadáspontja: 85-89 °C. 4-[3,3-bisz(2-metil-fenil)-3-hidroxi-propil]-lH- imidazoL, a hidroklorid olvadáspontja: 211-213 °C. 4-[33-bisz(3-metil-fenil)-3-lűdroxi-propil]-lH- imidazol, a hidroklorid olvadáspontja: 170-172 °C. 2. példa 4-(3,3-Difenil-2-propén-l-il)-lH-imidazol 2,0 g 4-(33*difenil-3-hidroxi-propil)-lH-imidazol-hidrokloridot összekeverünk 20 g kálium-hidrogén-szulfáttal, és a reakdóelegyet olajfürdőn melegítjük 150-155 °C hőmérsékleten 4 órán át. A kapott reakdóelegyet lehűtjük, és hozzáadunk 20 ml vizet. Az így kapott reakcióelegyet nátrium-hidroxid-oldattal meglúgosítjuk és lehűtjük. A kiváló csapadékot, amely a cím szerinti vegyület, szüljük, vízzel mossuk és szárítjuk. Kitermelés 1,25 g. Víz/etanol-elegyből történő átkristályosítás után a termék 124-218 °C hőmérsékleten olvad. ^-NMR:^ (d, 2H), 4,756 (s, 1H), 6,284 (t, 8 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
