200945. lajstromszámú szabadalom • Készítmény kontaktlencsék tisztítására és fertőtlenítésére
HU 200945 B 17 18 ó. Példa Peroxid enzimmel és enzim nélkül való hatását összehasonlító vizsgálat Vizsgálatot végeztünk arra vonatkozóan, hogy milyen mértékben fokozza szubtilizin enzim adagolása 3 tömeg/térfogat%-os hidrogén-peroxid mikroba pusztító sebességét. Az eredményeket az V. táblázatban százalékosan adjuk meg. A táblázatban a D-érték csökkenését mutatjuk be egy adott peroxid-oldat és az 1. példában ismertetett szubtilizin tabletta együettes hatásának és azonos peroxid oldat önmagában való alkalmazásának esetén. Az AO-Sept rendszerben nehézfém katalizátort (platinával bevont lemez) alkalmazunk az egyes csövekben a peroxid elbontására a 3 912 451. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban megadott módon. V Táblázat Organizmus Lensan A (Adatok a Oxysept I (Adatok a AO-Spet II. táblá-III. táblázatból) zatból) ierratia marcescens 50% 29% 88% Escherichia coli 71% 70% 90% Pseudomonas aentginosa 0% 0% 20% Staphylococcus aureus 38% 28% 60% Candida albicans 58% 35% 33% Aspergillus niger 0% 20% 32% Az V. táblázatban szereplő értékek azt mutatják, hogy a 3 tömeg/térfogat%-os peroxid oldat minden esetben hatásosabb fertőtlenítőszer Szubtilizin A jelenlétében, mint önmagában. A hatás különösen hangsúlyozott az AD-Sept rendszerben. 7. Példa A peroxid koncentráció hatása az enzimaktivitásra Az 1. példában leírt szubtilizin A tabletta és tripszin enzimaktivitását vizsgáltuk különböző hidrogén-peroxid koncentrációk mellett módosított Azocoll eljárással (lásd a Sigma katalógusban). A Baker Chemical Company-tól származó 3 tömeg/térfogat%-os hidrogén-peroxidot használtunk. A megfelelő hígításokat körülbelül pH = 8,4-es 0,02 mól/l-es borát pufferrel végeztük. Az Azocoll szubsztrát és a tripszin a Sigma Corporation termékei. A peroxidot először a pufferrel megfelelő koncentrációra hígítottuk. Egy szubtilizin enzim tablettát 10 ml pufferben oldottunk, amelyhez 50 mg Azocoll szubsztrátot adtunk. Ezután minden peroxid koncentrációhoz ebből az oldatból 1 ml-t adtunk, kontrollként enzimet, szubsztrátot és puffert tartalmazó oldat szolgált. A minták elegyítése után a reagáltatást szobahőmérsékleten 2 percig végeztük, majd a reakciót 2 ml 10%-os triklór-ecetsav hozzáadásával leállítottuk, miáltal az enzim kicsapódott. A minta színét 520 nm-en mértük. A szubtilizin aktivitásra vonatkozó eredményeinket a VI. táblázatban, a tripszin aktivitásra vonatkozó eredményeinket a VII. táblázatban ismertetjük. 30 VI. Táblázat Szubtilizin aktivitás hidrogén-peroxidban H2O2 (tömeg/térfogat%) OD 520 0 0,27 1 0,39 2 0,57 3 0,56 4 0,66 4,5 0,56 5 0,68 6 0,68 8 0,90 30 0,91 VII. Táblázat •Tripszin aktivitás hidrogén-peroxidban H2O2 (tömcg/térfogat%) OD 520 03 0,5 30 0,6 55 *A hidrogén-peroxid-oldathoz 10 mg tripszin port adtunk. A VI. táblázatból látható, hogy a szubtilizin A az Azocoll vizsgálatban széles peroxid koncentráció- 60 tartományban aktív. A 30 tömeg/térfogat%-os perocidban mért aktivitás közelítőleg azonos a 8%-os peroxidban mért aktivitással. A szubtilizin A enzim aktivitás 2 és 6 tömeg/térfogat%-os hidrogén-peroxid koncentrációk között telítettnek tűnik. Az V. 65 táblázatból látható, hogy a tripszin hidrogén-pero-10
