200932. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hatóanyagként 1-(béta-D-arabino-furanozil)-5-propinil-uracilt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 200932 B * = A hatóanyagot poralakban használjuk, amely legalább 90%-ban legfeljebb 63 jtm szemcseátmérőjű. A Witepsol H15 1/5-d részét gőzfűtéses edényben 45 °C hőmérsékleten megolvasztjuk. A hatóanyagot 200 p.m-es szűrőn átszitáljuk, az olvadékhoz adjuk és egyenletes diszperzióvá keverjük. A hőmérsékletet 45 °C értéken tartva hozzáadjuk a szuszpenzióhoz a maradék Witepsol Hl5-öt és homogén keverékké keverjük. A szuszpenziót 250 jim-es rozsdamentes acélszitán átszűrjük és keverés közben hagyjuk 40 °C hőmérsékletre hűlni. 38- 40 °C közötti hőmérsékleten 2,02 g keveréket megfelelő műanyag mintába öntjük. A szuppozitóriumot hagyjuk szobahőmérsékletre hűlni. I példa Pesszárium Hatóanyag (63p,m) 250 mg/pesszárium Vízmentes dextróz 380 mg/pesszárium Burgonyakeményítő 363 mg/pesszárium Magnézium-sztearát 7 mg/pesszárium 1000 mg/pesszárium A fenti komponenseket közvetlenül összekeverjük és közvetlen préseléssel pesszáriumot készítünk. Vírus elleni hatás és toxicitás mérése Humán citomegalovírust (HCMV) vizsgálunk egyrétegű MRC5 sejtteken (humán embrió tüdősejtek) vagy Detroit 532 sejteken (humán fityma kötőszöveti sejtek). A hatóanyag aktivitását a vértestek számának csökkenésével vizsgáljuk, amelynek során az egyrétegű sejtet HCMV szuszpenzióval fertőzzük, majd a vírusnak a tenyészeten történő elterjedésének megakadályozására gélformájú r>garóz táptalajjal fedjük le. Különböző koncentrációjú hatóanyagot adagolunk a felső agaróz tápréteghez. A vértestek számát minden hatóanyag-koncentrációnál a kontroll százalékában fejezzük ki és dózisfüggő görbén ábrázoljuk. Erről a görbéről az 9 50%-os gátló hatáshoz szükséges koncentrációt (IC50) határozzuk meg. MRC5 sejteken hasonló módon varicella zoster vírust (VZV vizsgálunk, azzal a különbséggel, hogy az agaróz fedőréteget elhagyjuk. A következő vizsgálathoz vírustermelő sejteket (P3HR-1) 14 napon keresztül a hatóanyaggal kezelünk, majd a sejtenként! EBV genom másolat számát EBV specifikus c-RNS-DNS hibridizációval határozzuk meg. Nonoyama és Pagano módszerével (Nature: New Biology Vol. 233,103-104 /1971/) Epstein-Barr vírust vizsgálunk. A megadott IC50 értékek az EBV genom sejtenkénti számának 50%os csökkenéséhez szükséges koncentrációt jelölik. Sejttoncitást vizsgálunk a sejtfejlődés gátlásának mérésével. Verő sejtek egybefüggő tenyészetét különböző koncentrációjú hatóanyaggal kezeljük és a sejtek életképességét naponta vizsgáljuk tetrazólium festés (MTT) segítségével. A sejtek életképességének 96 órán keresztül történő 50%-os csökkenéséhez szükséges koncentrációt CCID50 érték alakjában adjuk meg. A mérési eredményeket az alábbi táblázat tartalmazza: Hatóanyag_______ICso(uM) CCID50 (u)M) l-(béta-D-arabino-furanozil)-5-propil-uracil 1,97+ 500 10 +: 8 mérés átlaga SZABADALMI IGÉNYPONT Eljárás hatóanyagként (I) képletű l-(béta-D- arabino-furanozil)-5-propinil-uracilt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az ismert módon előállított hatóanyagot gyógyszerészeti célra alkalmas vivőanyaggal és/vagy egyéb gyógyszerészeti segédanyaggal keverjük és a keveréket adagolásra alkalmas készítménnyé alakítjuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 6
