200885. lajstromszámú szabadalom • Oldat szervek tartósítására
1 HU 200885 B 2 3. példa 24 órás májtartósítás A klinikai körülmények közön történő májtartósítás legfeljebb 6-10 órás időszakra korlátozódik. Ezen időtartamnak 24 órára - vagy ennél még hosszabb 5 periódusra - történő meghosszabbítása jelentősen befolyásolhatná a májtranszplantáció lehetőségeit. Izolált, átáramoltatott nyúlmájat hasztáltunk annak érdekében, hogy megállapítsuk a tartósítás minőségét, Collins-oldatban, Cambridge plazmafehérje-ffakció- 10 Kontroll Cambridge PPF Eurocolli 5,4±1,7 1,8±0,9 1,9±1,3 ban (PPF), Marshalls-oldatban, valamint a találmány szerinti oldatban végzett, hidegen történt tárolást követően (1. Táblázat). A hidegen tárolt májak normoterámiás átáramoltatása alatt az epetermelés bizonyult a leghasznosabb paraméternek az életképesség megállapítására. A táblázat az epetermelés mértékét (ml/100 g/óra + SD) mutatja be, összehasonlítva a kontrollok ás a 24 órán keresztül hidegben tárolt nyúlmájak értékeit. Marshalls Tartósító oldat 3,1±0,5 4,4±0,5 Az ismertetett összetételű, találmány szerinti tartósító oldat jobbnak bizonyult a többi, hidegen történő tárolásra alkalmas oldatnál az epetermelés mérésén alapuló vizsgálat során, hidegen (2,4 °C) történő 20 tárolást és normotermiás reperfúziót követően. A sikeres májtartósítás végső kipróbálási eljárása magán a transzplantációs modellen történik. A tartósító oldatot tehát ortotópiás májtranszplantációs modellen próbáltuk ki, kutyák esetében. Az 25 oldattal végzett, egyszerű átáramoltatás után egymást követően három kutyamájat tároltunk, 24-26 órás perióduson keresztül. Az átültetéskor úgynevezett kombinált „peremvarrat”-technikát alkalmaztunk. Va-6 óra m. 1. nap Bilirubin (mg %) 0,6±0,3 0,7±0,6 SGOT 21481983 183511145 Alkalikus foszfatáz 186114 217147 4. példa Vesetartósítás Az ismertetett összetételű, hidegen történő tárolásra (CS) alkalmas oldatot vesetartósítás során próbáltuk 40 ki, és megvizsgáltuk hatását a reperfúziót követő veseműködésre: 1) izolált, átáramoltatott vesemodellen, kutyák esetében (IPK - isolated perfused kidney); valamint 2) autotranszplantációs modellen, kutyák esetében. 45 1) A kutyaveséket vagy hidegen tároltuk 48 órán keresztül, Eurocollins (EC) oldatban, vagy pedig az ismertetett összetételű hidegen történő tárolásra (CS - cold storage) alkalmas oldatba helyeztük őket. A veseműködést figyelemmel kísértük az IPK modellel 50 végzett reperfúzió folyamán, oxigénnel telített, módosított, albumint tartalmazó Krebs-Henseleit-oldat felhasználásával, 37 °C hőmérsékleten, 90 percen keresztül. 10 percenként vizeletmintát vettünk és ezeket megvizsgáltuk. Kiszámítotuk a GFR (kreatinin- 55 clearance), a vizelet/plazmafehérje (U/P) arány és a frakcionált nátrium-reabszorpció (% Na) értékét. Az eredményeket a 3. Táblázat tartalmazza, az átlagértékek és a szórások (zárójelben történő) feltüntetésével. 60 Mindkét hidegen tárolt vese-csoport esetében csökkent veseműködés volt megfigyelhető a reperfúzió idején, a kontroll vesékkel összehasonlítva. Az EC- oldatban tárolt vesékkel ellentétben, a hidegen történő tárolásra alkalmas oldatban (CS) tárolt vesék GFR- 65 lamennyi máj külső megjenése az átültetést követően azonnal kielégítő volt. Mind a három kutya rögtön felébredt a műtét után, és az eljárást követően 4 órán belül már valamennyi állat lábra tudott állni. A vérlemezkék száma a műtét után 6 órával a normálértéknek felelt meg. Az alábbi táblázat a bilirubin- és enzimértékeket tünteti fel (átlag aeSD), a műtét után 6 órával, valamint a következő 7 nap folyamán. Az adatokból kitűnik, hogy a normális májműködés igen gyorsan helyreállt a transzplantációt követően. Egy kutya pusztult el a műtét utáni 5. napon, bélelzáródás következtében. 3. nap 5. nap 7. nap 0,9±0,7 0,5±0,4 0,4±0,2 61±16 55±40 45+21 273±126 311±64 315±48 értéke és nátrium-reabszorpciója szignifikánsan javult az IPK folyamán. Ez a funkciójavulás arra utal, hogy a GS-ben tartósított vesék gyorsabban képesek a hideg-okozta ischaemiás károsodás megszüntetésére, mint az EC-ben tárolt vesék. 2) Egymást követően nyolc kutyavesével végeztünk autotranszplantációt, CS-ben történt 48 órás tartósítást követően. Három állatot technikai komplikációk (artériás trombózis, bélelzáródás) miatt fel kellett áldoznunk. A 4. Táblázat a négy túlélő állat transzplantációt követően meghatározott szérum-kreatinin (átlag ±SD) értékeit mutatja be. A vizsgálat eredményei arra utalnak, hogy CS-oldattal, 48 órán keresztül, hidegen történt tárolás után a veseműködés megfelelő maradt. Ez az oldat tehát alkalmas a vese, a hasnyálmirigy és a máj tartósítására, és felhasználható mind egyszerű, hidegen történő tárolás, mind pedig folyamatos perfúzió során. 7
