200792. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új fibrinolitikus enzimek és hatóanyagként a fenti enzimeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
19 HU 200792 B kromogén szubsztrátból és 50 pl 5 pg/ml koncentrációjú poli-D-lizinböl, illetve kontrollként vízből áll. A reakciót 200 pl enzim hozzáadásával indítjuk el, és 37 °C-on 20 percen ét mérjük az optikai sűrűség változását 405 nm hullámhosszon. Azt tapasztaltuk, hogy poli-D-lizin távollétében ugyanolyan parabolaalakú görbét kapunk, mint amilyet urokinázzal kapunk poli-D-lizin jelenlétében, azonos körülmények között. Ha a GPK-ból származó enzimet tartalmazó reakcióelegyhez polí-D-lizint adunk az oldat zavarossá válik, mivel komplex képződik, ami a.z időben megváltoztatja az optikai sűrűséget. A fenti előzetes eredményekből arra következtethetünk, hogy a poli-D-lizin kölcsönhatásba kerül a GPK-ból származó enzimmel, mégpedig más módon, mint az urokinázzal. A fentiekből világosan látszik, hogy a találmány szerinti eljárással előállított enzimek a gyógykezelésben, megelőzésben és diagnosztizálásban egyaránt használhatók. Terápiás és megelőzési célra áz enzimeket gyógyszerkészítmények formájában alkalmazhatjuk. Előnyösen parenterálisan alkalmazható készítményeket készítünk úgy, hogy az enzimet gyógyászatilag elfogadható parenter'ális hordozóanyagokkal, például steril, lázkeltő anyagoktól mentes, fiziológiás sóoldattal összekeverjük. Humán alkalmazás esetén 24 órás időtartamra általában 10 mg - 80 mg dózist adunk, előnyösen 2-3 adagra osztva, intravénás injekció formájában. Diagnosztikai célra az enzimeket a szokásos izotóp jelzési módszerrel például i25I-dal vagy mIn-mal jelezzük. A radioaktiv jelzésű enzimet az érrendszerbe adva meghatározzuk azokat a helyeket, ahol a radioaktivitás fokozott mértékű. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás saját fibrinolitiküs aktivitással és/vagy plazminogénaktivátor hatással 5 rendelkező enzimek előállítására, azzal jellemezve, hogy GPK jelzésű, (CNCMI-222 számon deponált) vagy BEB jelzésű, (CNCMI-221 számon deponált) hámszövetsejtvonalat tenyésztünk és a tenyészetből izoláljuk a tárgyi 10 körben megnevezett aktivitású enzimtartalmú frakciókat. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az enzimtartalmú frakciót az enzimet tartalmazó felülúszó összegyűjtésével 15 kapjuk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az enzimtartalmú frakciót a sejtből extrahálással állítjuk elő. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike sze- 20 rinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a sejteíet szérumtartalmú táptalajban tenyésztjük, i táptalajt szérummentes táptalajra cseréljük, és az enzimet a fenti szérummentes tápalajt tartalmazó felülúszóból vagy a sejtek" 25 iözvetlen extrahálásával kinyerjük. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy nem redukáló körülmények íözött meghatározva 56000 ± 2000 dalton moekulatömegű, redukáló körülmények között 30 35000 ± 3000 dalton molekulatömegű enzimeiét izolálunk. 6. Az 5. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 4,6 izoelektromos ponttal rendelkező enzimeket izolálunk. 35 7. Eljárás fibrinolitiküs hatású gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely, az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti eljárással előállított enzimet a gyógyszerkészítésben szokásosan 40 használt hordozó- és/vagy egyéb segédanyagokkal összekeverve gyógyszerkészítménnyé alakítunk. 20 Kiadja az Országos Találmányi Hivatal, Budapest - A kiadásért felel: dr. Szvoboda Gabriella osztályvezető R 4955 - KJK 12 90.32.61.66-13-2 Alföldi Nyomda Debrecen - Felelős vezető: Szabó Viktor vezérigazgató
