200695. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szöveti plazminogén aktivátort tartalmazó stabil gyógyszerkészítmények elöállítására
HU 200695 B képes az oldat pH-ját semlegesre növelni, szinte azonnal, ahogy azzal érintkezik, mivel a t-PA gyorsan eloszlik a véráramban. Előnyös, ha ezt a folyamatot semmi nem gátolja, így a parenterális oldat nem tartalmaz erős pufferanyagot. Gyenge pufferoló hatású anyag — amely ezt a folyamatot nem gátolja jelentősen — lehet a készítményben, valójában savas pH-n a t-PA maga fejt ki gyenge pufferhatást. Ezenkívül a humán szérom-albumin is képes gyenge pufferhatás kifejtésére. Mivel a t-PA oldékonysága a találmány szerinti eljárással előállított parenterális oldatban igen nagy, nincs szükség egyéb anyagokkal—például lizinnel, omitinnel, vagy ezek sóival — növelni a t-PA oldhatóságát A parenterális oldatot a gyógyszerkészítésben szokásosan hasznák formálási eljárásokkal állíthatjuk elő, a t-PA-t tisztított oldata formájában vagy szilárd anyagként használva. A találmány szerinti eljárással a t-PA-t hatóanyagként tartalmazó vizes parenterális oldatot úgy állítjuk elő, hogy (a) az ismert módon előállított t-PA-ból ismert módon készített tisztított oldat közegét pH 2-5 értékű vizes közegre cseréljük; vagy (b) a t-PA-t 2-5 pH-jű vizes közegben oldjuk, majd a kapott oldatot sterilizáljuk. Vizes közegként előnyösen egy fiziológiásán elfogadható szervetlen só — például nátrium-klorid — vizes oldatát használjuk. A t-PA tisztítását a protein kromatográfiás oszlopról való eluálásának utolsó fázisaként hajthatjuk végre, amikoris a proteint erős puffot tartalmazó oldat formájában kapjuk. Mint említettük, a parenterális oldat előnyösen nem tartalmaz erői pufferanyagot, ezért azt célszerűen dialízissel távolítjuk el, miközben a közeget is kicseréljük. A dialízist dializáló csőben vagy mesterséges vesében hajthatjuk végre, amelyben a tisztított oldatot 2-5 pH-jú vizes közeggel szemben dializáljuk. Célszerűen úgyjárunklel - - különösen akkor, ha a t-PA koncentrációja a tisztított oldatban magas—, hogy először az oldat pH-ját állítjuk 2-5 értékre. Az erős puffer eltávolításának másik módja a közeg egyidejű kicserélésével az, hogy a tisztított oldatot gélszűrésnek vetjük alá, és az oszlopot 2-5 pH-jú vizes közeggel eluáljuk. A tisztított oldatból úgy állíthatunk elő szilárd formájú t-PA-t, hogy a tisztított oldat pH-ját közel 5,5- re állítjuk, az oldatot fagyáspontja körüli hőmérsékletre hűtjük, és a kicsapódott proteint—például centrifugálással—kinyerjük. Akicsapódott szilárd anyagot ezután a szokásos módon feloldhatjuk egy 2-5 pH-jú vizes közegben. A kapott oldatot ismert módon — például szűréssel — sterilizálhatjuk. A parenterális oldatot rendszerint leforrasztott, steril műanyag vagy üveg tartóban szereljük Iri. A parenterális oldatból egység-dózis formákat—például ampullákat, csöveket vagy egyszer felhasználásra száitt injekciós eszközöket—, vagy többszöri dózist tartalmazó formákat — például infúziós tartályokat vagy üvegeket — is készíthetünk. A fenti tartókban az oldat térfogata tág határok között változtatható, előnyösen 0,5 és 20 ml között lehet. A t-PA stabilizálására a parenterális oldatot előnyösen megfagyasztjuk és -10 és -30*C közötti hő5 mérsékleten tároljuk. At-PA-t—a vérrögök fibrinhálóját oldó biológiai aktivitása következtében — trombózisos betegségek kezelésére használhatjuk [The Lancet, 1981. november 7., 1018-1020; ugyanitt 1985. április 13., 842- 847; The New England Journal of Medicine, 210=10), 609-613 (1984); és ugyanitt, 212(14) 932- 936(1985)]. A találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítményt tehát emlősök trombózisos betegségeinek kezelésére használhatjuk oly módon, hogy a kezelendő alanynak a t-PA-t tartalmazó vizes parenterális oldatot adjuk, A trombóeisoe betegség például szív-infarktus, mélyvénás trombózis, tüdő-embólia vagy gutaütés lehet A találmány szerinti eljárással előállított parenterális oldatot intravaszkulárisan, különösen intravénásán adagolhatjuk, infúzió formájában, de bármely más módszert—például intramuszkuláris adagolást —is alkalmazhatunk. Az intravaszkuláris infúziót általában infúziós fecskendőben elhelyezett oldattal hajtjuk végre. Az infúziós tartályból vagy üvegből a gravitáció révén vagy infúziós szivattyú alkalmazásával juttathatjuk az oldatot a betegbe. Mivel a gravitáción alapuló adagolás nem teszi lehetővé az adagolás szabályozását, ezért a parenterális oldatot előnyösen infúziós szivattyú segítségével juttatjuk a betegbe, különösen akkor, ha az oldatbnan a t-PA koncentrációja viszonylag magas. Még előnyösebb az elektromosan működtetett infúziós fecskendő használata, amivel az adagolási sebesség még jobban szabályozható. A t-PA hatásos mennyisége emlősök trombózisos betegségeinek kezelésére természetesen számos tényezőtől függ, például a kezelendő alany korától és tömegétől, a kezelendő betegség tüneteitől és annak súlyosságától, a kezelés módjától, és azt végső soron a kezelő orvos határozza meg. Általában azonban például szívkoszorúér-trombus feloldására a dózis 150.000 és 450.000 NE/kg testtömeg/óra között lehet. így 70 kg-os felnőtt esetén a hatásos mennyiség óránként általában 1.000.000-3.000.000 NE, közelebbről 2000.000 NE, és ez a mennyiség primer dózissal vagy anélkül adagolható. A dózis valószínűleg kisebb bizonyos trombózisos állapotok — például mélyvénás trombózis vagy heveny gutaütés — esetén, vagy abban az esetben, ha egy már újra átjárható koszorúérben kell ezt az állapotot fenntartani. Ilyen esetekben a hatásos mennyiség általában 7000- 36000 NE/kg testtömeg/óra. A találmányt közelebbről — a korlátozás szándéka nélkül — az alábbi példák segítségével kívánjuk ismertetni. Az „ismert módon előállított kifejezés a jelen találmány elsőbbségi napja előtt publikált eljárásokat öleli fel. 1. példa Transzformált CHO sejtvonal tenyészetéből — melyet a [Molecular and Cellular Biology, 5(7), 1750-1759(1985)] irodalmi helyen leírtak szerint állítunk elő—nyert, t-PA-t tartalmazó, derített oldatot kromatográfiásan tisztítunk, és a t-PA-t 0,1 mól/1 nátrium-ciöátot és 0,01 vegyes% Tween 80-at tartalmazó vizes oldata formájában (pH 5,5) összegyűjtjük. Az oldat pH-ját sósavval 3,0-ra állítjuk, és a kapott 6 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
