200602. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-(2-tienil) -2-propin-1-amin-származékok és az ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 200602 B 2 módszerekkel határozhatók meg. Például annak eldöntésére, hogy a DBH-inhibíció kinetikája fugg-e az idótól, olyan eljárást alkalmazunk, melyben a DBH által végzett enzimatikus oxidáció mértékét vizes oldatban, molekuláris oxigén, egy elektrondonor - például valamely aszkorbinsavas só - és az enzimhez szükséges kofaktor jelenlétében, pH=4,5 és 5,5 közötti, előnyösen pH=5-nél, 20 ’C és 40 *C közötti, előnyösen 37 'C-os hőmérsékleten határozzuk meg. A vizsgált vegyületet a kívánt koncentrációban alkalmazzuk, és a rendszert inkubáljuk. Meghatározón időközökben aliquot mennyiséget veszünk ki, és a DBH aktivitást tiramin szubsztrát alkalmazásával mérjük. A reakció előrehaladását az oxigénfelvétel mérésével követjük, ehhez az S. May és munkatársai [J.Bio. Chem. 256, 2258 (1981)] által leírt módszer szerint polarográf elektródot és oxigén-monitort alkalmazunk. Az egyes minták aktivitás értékei azt mutatták, hogy a vizsgált vegyületek DBH inhibitor aktivitása az inkubációs idő függvényében növekedett. Az I. táblázatban feltüntettük a t 1/2 értéket, azaz azt az időt, melynél az enzimaktivitás a felére csökkent I. TÁBLÁZAT Időtől függő DBH inhibitor aktivitás (in vitro vizsgálat) Vegyület Koncentráció (M) 11/2 3-(2-tienil)-2-propin-l-amin 5 x 10-5 9,2 perc t 1/2 = az ahhoz szükséges idő, hogy az aktivitás 50 %-ra csökkenjen. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek vérnyomáscsökkentő hatását in vivo a szokásos és jól ismert módszerekkel, például eszméleten lévő állatok artériás vérnyomásának folyamatos mérésével határozhatjuk meg. A vizsgált vegyületeket például intraperitoneálisan (i.p.) adjuk be a nem érzéstelenített, spontán hipertenzív patkányoknak, és folyamatosan figyeljük az artériás vérnyomást Ezzel a módszerrel a vizsgált vegyület vérnyomáscsökkentő hatása - amit az átlagos vérnyomás (mean blood pressure, MBP) csökkenésének mértékével fejezünk ki - könnyen kimutatható, lásd a II. táblázatot. B. TÁBLÁZAT DBH inhibitor aktivitás (in vivo vizsgálat) Vegyület Dózis Az MBP maximális Időtartam, mg/kg változása ± St dev.* óra 3-(2-tienil)-2-propin-l-amin 30 (i.p.) -20 ± 8 Hgmm 14 * ± st dev. = a vérnyomás számított értékétől való standard eltérés. Az ilyen és egyéb - a DBH inhibitorok értékelésére használt - szokásos laboratóriumi toxicitás-vizsgálatok és az emlősökre kifejtett vérnyomáscsökkentő hatás meghatározására szolgáló farmakológiai vizsgálatok alapján, valamint az így kapott eredmények és az ismert vérnyomáscsökkentő szerek eredményeinek összevetésével a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek vérnyomáscsökkentő szerként hatásos dózisa könnyen meghatározható. Általában megfelelő vérnyomáscsökkentő hatást érhetünk el kb. 5 és kb. 100 mg/testsúly-kg/nap közötti dózisokkal. Természetesen az egyes betegeknél alkalmazandó kezdeti és folyamatos dózisok nagysága függ a magas vérnyomásnak a diagnoszta által meghatározott természetétől és súlyosságától. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületeket gyógyszerként előnyösen úgy alkalmazzuk, hogy a beteg állatnak olyan készítnényt adunk be, mely a vegyületek vérnyomáscsökkentő szerként hatásos mennyisége mellett valamely enterális vagy parenterális beadásra alkalmas hordozóanyagot tartalmaz. A készítmények formája lehet tabletta, kapszula, végbélkúp vagy valamilyen folyadék, például oldat, emulzió, spray, vagy injektálható folyadék. A készítmények összetételének meghatározásakor a szakmában jártasak könnyen megtudják választani azokat az anyagokat, melyek a találmány szerinti eljárással előállított vegyületekkel nem lépnek reakcióba. Ilyenek például a víz, zselatin, laktóz, a keményítők, magnéziumsztearát, talkum, növényi olajok, benzil-alkoholok, mézgák, a polialkilén-glikolok, a vazelin, stb. A készítmények előnyösen 0,1 és 50 súly% közötti arányban tartalmazzák a hatóanyagot SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás 3-(2-tienil)-2-propin-l-amin előállítására, azzal jellemezve, hogy az (V) általános képletű vegyületet - ahol hét jelentése 2-tienil-csoport - kálium-ftálimiddel reagáltatjuk, majd a kapott vegyületből a védőcsoportot eltávolítjuk. 2. Eljárás hatóanyagként 3-(2-tienil)-2-propin-l -amint tartalmazó, vérnyomáscsökkentő hatású gyógyászati készítmény előállítására, azzal jellemzve, hogy az 1. igénypont szerinti eljárással előállított hatóanyagot a gyógyszeriparban szokásos hordozó és/vagy segédanyagokkal összekeverve gyógyszerkészítménnyé alakítjuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
