200506. lajstromszámú szabadalom • Reagens, glükóz biológiai mintákban való meghatározásához
1 HU 200 506 A 2 1000 ml-re desztillált vízzel, majd ebben az oldatban oldjuk a 2, sz. üveg (Enzimek) tartalmát. Az oldat +2 - +8 °C-on három hónapig eltartható. „B‘-komponens A 3. sz. üveg (Színképző n.). Használatra kész. Korlátlan ideig eltartható. Színreagens: A napi vizsgálati számnak megfelelően 20 rész, A”komponenst elegyítsük 1 rész „B”-komponenssel. Jól összekeverjük. Színreagens komponenseinek összetétele a reakcióelegyben: Foszfát puffer: 150 mmól/1 (pH=7,8) 4-amino-fenazon: 0,94 GOD: 9E/ml POD: 14E/ml nátrium-azid: 11,3 mmól/1 m-krezol: 1,2 mmól/1 Minta: A vizsgálatot elvégezhetjük szérumból, plazmából, fehérjementesített vérmintából és vizeletből. Fehérjementesítőként 3-6%-os trildór-ecetsav-oldat (TCA) használható. , A magas büirubin tartalmú szérumot célszerű fehérjementesíteni. A vizsgálat menete szérum használata esetén: a vénából nyert megalvadt vért 1 órán belül centrifugáljuk, és a mérést 2 órán belül elvégezzük. A vizsgálat menete: Reagensvak Standard Minta Standard oldat-0,02 ml-Minta-0,02 ml Színreagens 2,5 ml 2,5 ml 2,5 ml 10 30 35 Összekeverjük, majd szobahőmérsékleten 30 percig vagy 37 °C-on 15 percig inkubáljuk. Leolvasás: A standard és a minták fény elnyelését 492 nm vagy Hg 546 nm, a spektrofotométeren 500 nm-en vagy 480-520 nm közötti színszűrővel, reagens vakkal szemben mérjük le, 1 cm fényutas küvettában, öt órán belül. Számolás: A ■‘Tnmta 40 ahol, A” - mért extinkció 30 mmól/1 érték felett a múltát kétszeresére hígítjuk desztillált vízzel vagy fiziológiás sóoldattal és a mérést megismételjük. Az eredményt kettővel megszorozzuk. Eljárás fehérjementesített mintából: Minta előkészítése: 1.0 ml 3-6%-os TCA-oldatba bemérünk 0,1 ml vért, összekeverjük, majd 10 perc állás után lecentrifugáljuk. A továbbiakban a tiszta felülúszót használjuk a vizsgálathoz. Standard hígítás: 1.0 ml 3-6%-os TCA oldathoz 0,1 ml standard oldatot adunk. Jól összekevr jük. A vizsgálat menete: 15 20 Reagensvak Standard Minta Desztillált víz 0,2 mlStandard keverék-0,2 ml-Minta felülúszó-0,2 ml Színreagens 2,5 ml 2,5 ml 2,5 ml Összekeverés, inkubálás, valamint a mérés menete egyezik a szérumnál leírtakkal. Normál érték: 25 Szérum: 3,35-5,55 mmól/1 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Reagens glükóz biológiai mintákban történő meghatározására, amely 4-amino-fenazont, nátrium-azidot, enzim-katalizátort és puffer-oldatot tartalmaz, azzal jellemezve, hogy reaktánsként vízben oldott meta-krezolt 0,5-1,5 mmól/liter koncentrációban tartalmaz. 2. Az 1. igénypont szerinti reagens, azzal jellemezve, hogy 0,5-1,5 mmól/liter 4-amino-fenazont, 10-15 mmól/liter nátrium-azidot, 8-12 U/ml glükóz-oxidázt, 10-20 U/ml pcroxidázt, 0,05-0,5 mmól/liter Na2HP04-KH2P04 tartalmú puffer-oldatot és 1-1,5 mmól/liter meta-krezolt tartalmaz. Glükóz mmól/1-^standard X 10 45 4
