200480. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az alpha-melanotropin nyíltláncú és gyűrűs analógjai előállítására
1 HU 200480 B ? Orn ornitin Phe fenil-alanin pCl-Phe p-klór-fenil-alanin Pro prolin Ser szerin Thr treonin Trp triptofán Tyr tirozin Val valin Az a-melanotropin nyfltláncú analóg fragmenseinek a jelen találmány szerinti előállítását a továbbiakban - a találmány oltalmi körének szűkítése nélkül - példákkal szemléltetjük. 1. példa Ac-[Nle4,D-Phe7,Lysl0,Glyn J-a-MSHi-i 3NH2 A cím szerinti vegyület előállítása céljából elő- 20 szőr 2 g p-metil-benzhidril-amin gyantához (amely grammonként 0,7 rnmól aminocsoportot tartalmaz) a szilárd fázisú peptid-szintézis módszerével, az a-amino-csoportján tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett valint kapcsolunk, a kapcsoláshoz az amino- 25 sav háromszoros fölöslegét használjuk. Másfél órás reagáltatás után a gyantát diklór-metánnal mossuk, semlegesítjük, és az aminocsoportot ecetsav-anhidrid és piridin elegyével megacetilezzük. Félórás reakcióidő után a ninhidrines próbával már nem lehet reak- 30 cióképes aminocsoportokat kimutatni a gyantán. Az egyes aminosavakat egymás után hozzákapcsoljuk a gyantához kötött peptidlánchoz, ezt minden egyes aminosavval az alábbi műveletsor végrehajtása útján végezzük el: 35 1. a gyantát négyszer 30 ml diklór-metánnal 2-2 percig mossuk. 2. a tercier-butoxi-karbonil-csoportot 2 % anizolt is tartalmazó. 48 %-os diklór-metános trifluor-ecetsav-oldat kétszeri alkalmazásával lehasítjuk, az első 40 kezelés időtartama 5 perc, a másodiké 20 perc, 3. a gyantát négyszer 30 ml diklór-metánnal 2-2 percig mossuk, 4. a gyantát kétszer 30 ml 10 %-os diklór-metános diizopropil-etil-amin-oldattal 2-2 percig rázatva 45 semlegesítjük, 5. a gyantát kétszer 30 ml diklór-metánnal 2-2 percig mossuk, 6. a gyantához hozzáadjuk az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett aminosav há- 50 romszoros fölöslegét (a jelen esetben 2,1 mmól-nyi mennyiségét) 5 ml diklór-metánban, utána az elegyhez hozzáadunk 2.4 ml 1 mmól/ml koncentrációjú, dimetil-formamidos N-hidroxi-benzotriazol-oldatot (kivéve az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal és az imidazolgyűrű nitrogénatomján p-toluol-szulfonil-csoporttal védett hisztidint), majd végül 2,4 ml 1 mmól/ml koncentrációjú, dimetil-formamidos diciklohexil-karbodiimid-oldatot. Ezután az elegyet 2-3 órán át rázatjuk (a triptofán. arginin és hisztidin esetében a kapcsolás oldószereként dimetil-formamidot használunk), 7. a kapcsolás lejátszódása után (amikor a ninhidrines próba negatív eredményt ad) a gyantát háromszor 2-2 percig 30 ml diklór-metánnal mossuk, 8. a gyantát 3 ml 100 %-os etanollal 2 percig mossuk, és végül 9. a gyantát négyszer 30 ml diklór-metánnal 1-1 15 percig mossuk. A cím szerinti pepiidet védett és a gyantához kötött formában úgy állítjuk elő, hogy a gyantához kötött, és védőcsoportot már nem tartalmazó valinhoz stepwise módszerrel (egyenként), az alábbi sorrendben hozzákapcsoljuk a következő, megfelelően védett aminosavakat:- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett prolin,- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett glicin,- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal, az epszilon-amino-csoporton pedig 2- -klór-benziloxi-karbonil-csoporttal védett lizin,- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal, az indol-gyűrűrendszer nitrogénatomján pedig formilcsoporttal védett triptofán, - az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal, a guanidinocsoporton pedig p-toluol-szulfonil-csoporttal védett arginin, - az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett D-fenil-alanin, és- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal, az imidazolgyűrű nitrogénatomján pedig p-toluol-szulfonil-csoporttal védett hisztidin. Az így kapott, Boc-His(Nim-Tos)-D-Phe-Arg(NS-Tos)-Trp(N'-For)-Lys(NE-2Cl-Z)-Gly-Pro-Val-p-MBHA képletű, védett peptidláncot hordozó gyantát négy részre osztjuk. Ezután az egyik, 1,0 g súlyú (körülbelül 0.5 mmól) részlethez az alábbi, védett aminosavakat kapcsoljuk:- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett glutaminsav-gamma-benzil-észter,- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett norleucin,- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett szerin-O-benzil-éter,- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal, és a fenolos hidroxilcsoporton 2-bróm-55 -benziloxi-karbonil-csoporttal védett tirozin, és- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett szerin-O-benzil-éter. Az utolsó aminosavval végzett kapcsolás után az a-amino-csoportról lehasítjuk a tercier-butoxi-karbo- 60 nil-csoportot. a kapott vegyületet semlegesítjük, és a védett, gyantához kötött peptidet 20 ml diklór-metánban, 10-szeres fölöslegben vett N-acetil-imidazollal az a-amino-csoporton megacetilezzük. Az így kapott. védett peptidláncot hordozó gyantát csökkentett 65 nyomáson megszárítjuk (súlya: 1.0 g). A védett pep-6
