200474. lajstromszámú szabadalom • Eljárás renin-gátló di- és tripeptidek, valamint ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 200474 B 2 elő aldol-analóg addíció segítségével, például nitrometánnal. majd ezt követő katalitikus hidrogénezéssel. például átmenetei fémkatalizátor. így Raney-nikkel jelenlétében. Az (V) általános képien! diaminok enantiomer tisztaságát az ismert módon Mosher-származékká történő átalakítással vizsgáljuk. Az (I) általános képien! vegyületek előállítása során alkalmazott előzetes és utólagos átalakítások, például védőcsoportok bevitele és lehasítása. az irodalomból ismert (például T. W. Greene: ..Protective Groups in Organic Synthesis”). A sóképző csoportot tartalmazó (1) általános képletű vegyületek sóit önmagában ismert módon állítjuk elő, amelynek során a bázikus csoportot tartalmazó (1) általános képien! vegyületet például sztöchiometrikus mennyiségű megfelelő savval reagáltatjuk. A sztereomer keverékek, elsősorban a diasztereomer keverékek, amelyek racém A vagy B aminosav alkalmazása esetén keletkeznek, önmagában ismert módon frakcionált kristályosítással vagy kromatográfiásan választhatók el. Az (I) általános képletű vegyületek enzim-gátló tulajdonsággal rendelkeznek, elsősorban a természetes Renin-enzim hatását gátolják. A renin az aszpartil-proteázok csoportjában tartozó proteolitikus enzim, amely különböző stimulációk (térifogatdepléció. nátriumhiány. ß-receptor stimuláció) hatására a vese juxtaglomeruláris sejtjeiből választódik ki a vérkeringésbe. A májból kivált angiotenzinogénből kihasítja a dekapeptid-angiotenzin 1-et. Ez az antiotenzin konverting enzim (ACE) hatására angiotenzin 2-vé alakul. Az angiotenzin 2 fontos szerepet játszik a vérnyomás szabályozásában, amelynek során a véredények összehúzásával közvetlenül növeli a vérnyomást. Emellett stimulálja az aldoszteronnak a mellékveséből történő kiválasztását és így a nátriumkiválasztás gátlásával növeli a sejtek közötti folyadék térfogatát, amely a vérnyomás növekedés irányába hat. A renin enzim aktivitását gátló anyagok csökkentik az angiotenzin 1 képződését, ami az angiotenzin 2 képzésének csökkenését eredményezi. Az aktív peptid-hormon koncentrációjának csökkenése eredményezi a Renin-gátló vérnyomáscsökkentő hatását. A renin-gátlók hatékonyságát in vitro vizsgálatokkal ellenőrizhetjük. Ehhez az angiotenzin 1 képződésének csökkenését különböző rendszerekben (humán plazma, sertés renin) mérjük. A vizsgálathoz például a humán plazmát, amely Renint és angiotenziogént is tartalmaz. 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk a vizsgálandó hatóanyaggal. Ezután a inkubáció alatt képződött angiotenzin 1 koncentrációját Radioimmun-assay módszerrel mérjük. Az (I) általános képletű vegyületek az in vitro vizsgálatok szerint gátló hatásukat mintegy 10"0—10-10 mól/1 koncentrációnál már kifejtik. A renin-gátlók sóban szegény állatoknál vérnyomáscsökkentést eredményeznek. Mivel az emberi Renin más fajták Renin-jétől különbözik, a renin-gátlók in vivo vizsgálatához főemlősöket (Rhesus-majmot) alkalmaznak. A főemlős renin és a humán renin szekvenciája messzemenően homológ. Furoszemid i.v. injekciójával endogén renin-kiválasztást váltunk ki. A vizsgált hatóanyagokat folyamatos infúzióval adagoljuk és a vérnyomásra és szív frekvenciára gyakorolt hatásukat mérjük. Az új hatóanyagok mintegy 0.1-5 mg/kg i.v. dózisban hatékonyak. Az (I) általános képletű vegyületek tehát antihipertenziós szerként, valamint szívelégtelenségek kezelésére felhasználhatóak. Gyógyszerkészítmények előállításához az (I) általános képletű vegyületek hatékony mennyiségét szervetlen vagy szerves, gyógyászati lag alkalmas hordozóval keverjük. Az adagolás történhet intranazálisan. intravénásán, szubkután vagy orálisan. A hatóanyag dózisa a melegvérű fajtájától, testsúlyától, korától, valamint az adagolás módjától függ. A gyógyszerkészítmények előállításához az ismert oldási, keverési, granuláló és drazsírozó eljárásokat alkalmazzuk. Orális adagoláshoz az aktív hatóanyagot a szokásos segédanyagokkal. így hordozóanyagokkal, stabilizátorokkal vagy inert hígítóanyagokkal keverjük és az ismert módon megfelelő adagolási formává alakítjuk, így tablettává, drazsévá, kapszulává, vizes, alkoholos vagy olajos szuszpenzióvá, valamint vizes, alkoholos vagy olajos oldattá. Inert hordozóanyagként alkalmazható például gumiarábikum. magnéziumoxid. magnéziumkarbonát. kálium-foszfát, tejcukor, glükóz, magnézium-sztearin-fumarát vagy keményítő, előnyösen kukoricakeményítő. A készítmény előállítható száraz vagy nedves granulálással. Olajos hordozóanyagként vagy oldószerként alkalmazhatók például növényi vagy állati olajok. így napraforgóolaj vagy csukamájolaj. Szubkután vagy intravénás adagoláshoz az aktív hatóanyagot szokásos anyagokkal. így oldásközvetítőkkel. emulgeátorokkal vagy egyéb segédanyagokkal oldattá, szuszpenzióvá vagy emulzióvá alakítjuk. Oldószerként alkalmazható például víz. fiziológiás konyhasóoldat vagy alkoholok, például etanol. propándiol vagy glicerin, valamint cukoroldat. így glükóz- vagy mannit-oldat, illetve ezek elegyei. A leírásban alkalmazott rövidítések jelentése: Ac acetil ACHPA (3S,4S)-4-amino-3-hidroxi-5-ciklohexil-pentánsav BOC terc-butoxi-karbonil-csoport DC vékonyrétegkromatográfla CDD diciklo-hexil-karbodiimid DNP 2,4-dinitrofenil-csoport DMF dimetil-formamid DMSO dimetil-szulfoxid EE etil-acetát Etoc etoxi-karbonil-csoport FAB gyors-atom-bombázás (fast atom bombardment) H hexán HOBt 1 -hidroxi-benzotriazol Iva izovaleril-csoport M molekulacsúcs MeOH metanol MS tömegspektrum MTB metil-terc-butiléter Sta (3S.4S)-4-amino-3-hidroxi-6-metil-heptánsav Thi ß-2-tienilalanin THF tetrahidrofurán Z benzil-oxi-karbonil-csoport. Az aminosavak rövidítéseire alkalmazott megjelölések megfelelnek a peptid kémiában szokásos három5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
