200473. lajstromszámú szabadalom • Eljárás difluor-ciklosztatint tartalmazó polipeptidek és az azokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 200473 B 2 'H-NMR-spektrum, DMSO-dó, 300 mHz, részleges, ppm TMS-ból: 1,27 (t, 3H, etil CH3), 1,30 (s, 9H, Boc), 2,70, 3,90 és 4,44 (m, 1H ea), 2,90 és 4,16 (m, 2H ea), 4,29 (q, 2H, etil CH2), 6,86 és 7,52 (s, 1H ea, imidazolil CH), 7,05, 7,65 és 8,13 (d,'lH ea, NH), 7,15-7,35 (m, aromás és NH, 6-7H). 4. példa N-terc-Butoxi-karbonil-L-fenil-alanil-L-N(im-terc-butoxi-karbonil-hisztidin [BocPheHis(imBoc)] A. Boc-L-fenil-alanil-L-hisztidin-metil-észter 36,4 g L-hisztidin-metil-észter-dihidroklorid 1 1 diklór-metánnal készített szuszpenzióját 5 *C hőmérsékletre hdtjük, és 52 ml trietil-aminnal kezeljük. 10 perc elteltével 40 g Boc-L-fenil-alanint adunk hozzá, majd ezt követően 30,6 g 1-hidroxi-benzotriazolt, végül további 5 perc után 30,8 g diciklohexil-karbodiimidet, és az elegyet 0 "C hőmérsékleten 4 órán át és 20 ’C hőmérsékleten 90 órán át keveijük. Az elegyet ezután szüljük, és a szüredék diklór-metánnal mossuk, majd az egyesített szerves fázisokat bepároljuk, és a maradékot 1 1 etil-acetátban oldjuk. 10 perces keverés után az elegyet leszüljük, és a szűrletet háromszor 150 ml 1 n nátrium-hidroxid-oldattal, telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, majd vízmentes magnézium-szulfát felett szántjuk és bepároljuk, ily módon 45,9 g színtelen, szilárd anyagot kapva, melyet további tisztítás nélkül használunk fel a B. lépésben. B. BocPheHis(imBoc) Az A. lépésben nyert szilárd anyag 40 g-ját 600 ml metanolban és 200 ml vízben oldjuk, majd a 0 “C hőmérsékletre hűtött elegyet 40 g vízmentes kálium-karbonáttal kezeljük, 15-20 "C hőmérsékleten 2,5 órán át, 28 ‘C hőmérsékleten 1,5 órán át keveijük, majd 10 "C hőmérsékletre hűtjük, és pH-ját 12 n sósav hozzáadásával 4,2 értékre állítjuk. A fenti oldatot körülbelül 250 ml térfogatúra koncentráljuk, és 70 ml vizet, majd 660 ml dioxánt adunk hozzá. Az oldat pH-értékét 0 *C hőmérsékleten 13,5 értékre állítjuk és 29 mg di-terc-butil-dikarbonátot adunk hozzá. Félóra elteltével, mely idő alatt a hőmérséklet 20 *C-ra emelkedik, a pH-értéket 9,5-re csökkentjük, és 10 ml di-terc-butil-dikarbonátot adunk az elegyhez. 1 óra elteltével a pH-érték 8,0, és a reakció teljesen lejátszódik, fordított fázisú HPLC szerint. Az elegyet ezután bepároljuk, és ily módon eltávolítjuk a dioxánt, majd 300 ml vizet adunk hozzá, és az elegyet kétszer éterrel mossuk, majd 500 ml etil-acetátot adunk hozzá, és tömény pH-értékét 10 “C hőmérsékleten 1,2-re állítjuk, tömény sósav adagolásával. A szerves fázist elválasztjuk, és a vizes fázist kétszer etil-acetáttal mossuk. Az etil-acetátos fázisokat egyesítjük, vízzel, majd telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium- szulfát felett szárítjuk és bepároljuk, majd éterrel többször újra bepároljuk és 25 *C hőmérsékleten szárítjuk. Ily módon színtelen habot kapunk, melynek súlya: 44 g. HPLC: 60/40 acetonitril/pH 2,1, 0,1 mólos foszfát-puffer, töltet: Zorbax C-8 25 cm x 4,6 mm, 214 nm, 1,5 ml/perc retenciós idő, 3,23 (a teljes abszorpció 94 %-a 10 perc alatt). SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás (I) általános képletű peptidek előállítására, ahol Rl 1-3 szénatomos alkoxicsoport vagy 1-3 szénatomos alkil-amino-csoport, és X (a) vagy (b) képletű csoport, azzal jellemezve, hogy valamely (V) általános kép. letű vegyületet jégecet-víz eleggyel kezelünk szobahőmérsékleten, majd izoláljuk a kapott terméket. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 4:1 tf/tf arányú jégecet-víz elegyet alkalmazunk, és a terméket a reakcióelegy bepárlásával választjuk el. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletű vegyületek előállítására, ahol Rl metil-amino-csopoit, és X (a) képletű csoport, azzal jellemezve, hogy a megfelelően szubsztituált vegyületekből indulunk ki. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletű vegyület előállítására, ahol Rl metil-amino-csoport, és X jelentése (b) képletű csoport, azzal jellemezve, hogy a megfelelően szubsztituált vegyületekből indulunk ki. 5. Eljárás gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1-4. igénypontok bármelyike szerint előállított (I) általános képletű peptidet, ahol Rí és X az 1. igénypontban megadott, gyógyszerkészítmények előállításánál általánosan alkalmazott adalékanyagokkal összekeverünk és szokásos dózisformává alakítunk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 5
