200466. lajstromszámú szabadalom • Eljárás N-acetil-3-fluor-neuraminosav-származékok előállítására
1 HU 200466 B 2 4,18-4,26 (3H, H-4, H-5, H-6) 3,58 (H-7, J6,7 = 0 Hz) 3,73 (H-8, J7,8 = 9,16 Hz, J8.9 = 3,30 Hz, Í8.9’ = 6,05 Hz) 3.63, 3,81 (H-9, H-9’, J99’ = 11,91 Hz) 2.06 (NCOCH3) 3,95 (COOCH3). 4. példa 1-2 % 0,5 n nátrium-hidroxid vizes oldatát tartalmazó 8 ml vízmentes metanolhoz hozzáadunk 250 mg (0,49 mmól) metil-5-acetamido-4,7,8,9-tetra-0- -acetil-2,3,5-tridezoxi-2,3-difluor-D-eritro-ß-L-glüko-2-nonulozonátot, és az elegyet 1 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük. Ezután a reakcióelegyhez hozzáadunk 2 mmól nátrium-metoxidot tartalmazó 1 ml metanolt, és az elegyet szobahőmérsékleten 30 percig keveijük. A reakcióelegyhez ezután kis fölöslegben Dowex 50 (H+) gyantát adunk, és az elegyet keverjük. A gyantát leszűrjük, és 10 ml vízzel mossuk. A szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk, és a maradékot vízben oldjuk. Az oldathoz kis mennyiségű aktív szenet adunk, és az elegyet keverjük. Az aktívszenet leszűrjük, és a szűrletet vákuumban megszárítjuk, így 128 mg (76 %) (5) képletű terméket kapunk. (5) 5-acetamido-2,3,5-tridezoxi-2,3-difluor-D-eritro-ß-L-glüko-2-nonulozonsav. Fizikai adatok: Op.: 206 °C. [cx]d20 -45,2° (C = 2,22, H2O) Elemanalízis: C11H17NO8E2 számított: C: 40,12; H: 5,20; N:4,25. talált: C: 40,23; H: 5,11; N:4,16. 'H-NMR 8 (D2O) 4,80 (H-3, J3,4 = 8,79 Hz) 4,12-4,23 (3H, H-4, H-5, H-6) 3,55 (H-7, J6,7 = 0,74 Hz) 3,75 (H-8, J7,8 = 8,66 Hz, J8,9 = 5,87 Hz, Í8.9' = 2,75 Hz) 3.63, 3,82 (H-9, H-9’, J9,9- = 11,73 Hz). 2.06 (NCOCH3). 5. példa A 3. példa szerinti módon, kiinduló anyagként 55 mg, az 1. vagy 2. példa szerint kapott, (2) képletű metil-5-acetamido-2,4,7,8,9-penta-0-acetil-3,5-didezoxi-3-fluor-D-eritro-ß-L-glüko-2-nonulozondtot használva a (6) képletű terméket kapjuk. (6) metil-5-acetamido-3,5-didezoxi-3-fluor-D-eritro-ß-L-g!üko-2-nonulozonät. Fizikai adatok: Op.: 209 °C (metanol, etil-acetát és petroléter elegyéből átkristályosítva). [a]D20 -41,14° (C = 0,86, H20) Elemanalízis: C12H20NO9F számított: C: 42,23; H: 5,9; N:4.1. talált: C: 42,37; H: 6,0: N: 4,3. 'H-NMR 5 (D2O) 4,75 (H-3, J3,4 = 8,98 Hz) 4,09-4,18 (3H, H-4, H-5, H-6) 3,56 (H-7, J6,7 = 1,10 Hz) 3.71 (H-8, J7.8 = 8,79 Hz, Jg.9 = 6,05 Hz, J8,9’ = 3,43 Hz) 3.63, 3,8 (H-9, H-9’, J9,9’ = 11,9 Hz) 2.06 (NCOCH3) 3,91 (COOCH3). 6. példa 20 % In nátrium-hidroxid vizes oldatát tartalmazó 1 ml metanolhoz hozzáadunk 20 mg (0,036 mmól), az 1. vagy 2. példa szerinti módon előállított (2) képletű metil-5-acetamido-2,4,7,8,9-penta-O-acetil-3,5-didezoxi-3-fluor-D-eritro-ß-L-glüko-2-nonulozonátot, és az elegyet szobahőmérsékleten 1 óra hosszat keverjük. Ezután a 4. példa szerinti módon 9 mg (76 %) (7) képletű terméket kapunk. (7) 5-acetamido-3,5-didezoxi-3-fluor-D-eritro-ß-L-glüko-2-nonulozonsav. Fizikai adatok: Op.: 205 "C. [cc]d20 -40,02° (C = 0,86, H20) Elemanalízis: C11H18NO9F számított: C: 40,37; H: 5,54; N: 4,27. talált: C: 40,07; H:5,51; N:4,21. 'H-NMR 5 (D2O) 4.71 (H-3, J3.4 = 8,42 Hz) 4, KM, 15 (3H, H-4, H-5, H-6) 3,54 (H-7, J6.7 = 0 Hz) 3,73 (H-8, J7 8 = 8,79 Hz, J8,9 = 6.05 Hz, J8.9- = 2,75 Hz) 3.63, 3,83 (H-9, H-9’, J9.9' = 11,91 Hz). 2.06 (NCOCH3). A találmány szerinti vegyületek szialidáz-gátló aktivitása 10.10~3 egység/ml szialidáz enzimet tartalmazó kémcsövekbe bemérünk 100 JJ.1 0,6 mmól/1 koncentrációjú (III) képletű 4-metil-umbelliferil-N-acetil-neuraminsavat (4-MU-Neu Ac, Nakarai Kagaku K.K., Japán gyártmánya) és 100 pl 200 mmól/1 koncentrációjú nátrium-acetát puffert (pH=4,2), továbbá 100 pl 1-100 pmól/1 koncentrációjú N-acetil-3-fluor-neuraminsav oldatokat [(7) képletű vegyület, 6. példa terméke], és 15 percig 37 °C-os vízfürdőben tartjuk. (A szialidáz enzim Arthrobacter ureafaciens baktériumból nyert termék, Nakaraki Kagaku K.K., Japán gyártmánya). A reakciót ezután 3,6 ml 200 mmól/1 koncentrációjú glicin-nátrium-hidroxid puffer-oldattal (pH=10,4) leállítjuk. A felszabadult sziálsav mennyiségét a 360 nm és 440 nm hullámhossznál spektrofotométerrel (Hitachi Ltd., Japán) mért fluoreszencia intenzitásból a 4-metil-umbelliferon koncentrációjából számoltuk. A szalidáz gátlásának arányát a következő képlet alapján számoltuk: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
