200367. lajstromszámú szabadalom • Eljárás indanomicin és homoindanomicin, valamint ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 200367 B 2 Konc. mg/1 Gátolt zóna átmérő (mm) Indanomicin Homoindanomicin pH = 8,0 pH = 7,0 pH = 6,5 pH = 8,0 pH = 7,0 pH = 6,5 5 20,5 19,4 17,2 22,86 21,2 19,2 2,5 176 17,66 16,1 19,2 19,0 18,2 1,25 0k 15,2 14,5 0 15,4 16,1 * = nincs gátlásgyűrű A vizsgált antibiotikumok melegvérűek sejtjeire kifejtett toxicitását a 5. táblázat tartalmazza. 5. táblázat 15 A homoindanomicin és indanomicin szövettoxicitásának vizsgálata Módszer S. Horváth: Toxicology. 16: 59, (1980) Szövet: HeLa sejttenyészet 20 Vegyület CT0 (mg/1) CT50 (mg/1) Homoindanomicin 0,5 2,0 Indanomicin 0,079 0,158 CT0 = a hatóanyag olyan legnagyobb koncentrációja, amely a HeLa sejtekre még mérhető károsodást 30 nem fejt ki. CT50 = a hatóanyag olyan koncentrációja, amely a HeLa sejtek felén látható toxikus hatást okoz. HeLa sejt = human cervix-carcinoma laboratóriumi tenyészetben fenntartott sejtvonala. 35 A táblázatból kitűnik, hogy a homoindanomicin kevésbé szövettoxikus, mint az indanimicin. Ames tesztben [D.M. Maron, B.N. Ames: mutation Research 113: 173 (1983)] sem az indanomicin, sem a homoindanomicin nem emeli a revertánsok számát 40 jelentősen még 500 pg/lemez, azaz kb. 20 pg/ml töménységben sem. Ez a töménység hatástalan Gram negatív tesztorganizmusok szaporodására, de sokszorosa a melegvérű állatok sejtjeire toxikus koncentrációnak. 45 Az indanomicin és homoindanomicin akut toxicitását egerekben határoztuk meg. Az eredményeket az 5. táblázat tartalmazza. 6. táblázat 50 A homoindanomicin és indanomicin akut, egyszeri toxicitásának vizsgálata egerekben Egerek: OFi (LATI, Budapest) fajtájú, 21-23 g-os hím egerek csoportonként 3 db. 55 Megfigyelés: 14 nap Kiértékelés módja: grafikus A homoindanomicin Tween 80-nal és fiziológiás sós vízzel készített szuszpenzióját vizsgáltuk, a hígításokat is fiziológiás sós vízzel készítettük. 60 Az indanomicint dimetilszulfoxidban oldottuk és fiziológiás töménységű sós vízzel hígítottuk. Az így keletkező szuszpenzióval végeztük az állatok keze-A vegyület jele Adagolás módja LD50 mg/kg Indanomicin p.o. 110 s.c. 42 i.p. 23 Homoindanomicin p.o. 60 s.c.i.p. 40 Az indanomicin és a homoindanomicin, illetve a két antibiotikumot tartalmazó antibiotikum-komplex jól alkalmazható haszonállatok, főleg sertések és kérődzők takarmánykeigészítőjeként. Mivel nem szívódik fel, hatását helyileg fejti ki, ezért az állatok szerveiben, izomzatúban és szekrétumaiban maradék antibiotikum megjelenésére nem kell számítani. Az indanomicin és a homoindanomicin a hatás csökkenése nélkül kombinálhatok más takarmány-adalékokkal. A találmány eljárást az alábbi kiviteli példákkal szemléltetik. 1. példa Streptomyces galbus NCAIM 001036 sz. törzs élesztővelkivatot és keményítőt tartalmazó ferdeagaron növesztett tenyészetéről készített spóraszuszpenzióval 500 ml-es Erlenmeyer lombikban sterilezett 100 ml R-jelű, alábbi összetételű táptalajt oltunk: Glükóz 3,0 % kazein-hidrolizátum (10 %-os oldat) 1,0% kukoricalekvár (50 % szárazanyag tartalom) 0,2 % Napraforgóolaj 0,2 % nátrium-klorid 0,5 % kalcium-karbonát 0,5 % csapvízben. Sterilezés előtt a táptalaj pH-ja 7,0-7,2. A táptalajt 121 ‘C-on, 25 percig sterilezzük. A tenyésztést síkrázógépen (270 fordulat/perc, 3,5 cm kitérés) végezzük, 28 "C-on. A fermentáció során keletkező antibiotikumok mennyiségét mikrobiológiai módszerrel, agár-diffúziós technikával mérjük [Analytical Microbiology, I. kötet: 87. oldal, szerkeszti: F. Kavanagh (1963) Academic, Press, New York], Bacillus subtilis ATCC 6633 tesztorganizmust és 8-as pH-jú agartáptalajt valamint indanomicin standardot alkalmazva. A tenyésztés 96. órájában a fermentlében 180 mg/ml-es antibiotikum-koncentrációt mérünk. 2. példa A Streptomyces galbus NCAIM 001036 sz. törzs élesztőkivonatot és keményítőt tartalmazó ferdeagaron 5
