200366. lajstromszámú szabadalom • Eljárás módosított higromicin rezisztencia gén előállítására

1

HU 200366 B

2

A témában jártas szakember felismeri, hogy más, rövidített gének, molekuláris linkerekkel kiegészítve, vagy anélkül is fuzionálhatók a találmány szerinti csonka aph(4) génnel, amely esetekben szintén a találmány oltalmi köréhez tartozó plazmidokat kapunk.

A találmány szerinti dezoxi-ribonukleinsavat tartalmazó vektorokat felhasználhatjuk bármely higromicin B antibiotikumra érzékeny gazdasejtben, azzal a feltétellel, hogy

1) a vektor replikálődik a gazdasejtben, vagy integrálódik a gazdasejt kromoszómájába;

2) a csonka aph(4) génnel fuzionált gén kifejeződik a gazdasejtben; és 3) a gazdasejt transzformálható.

Gazdasejtként használhatunk például alábbi sejteket: E. coli, E. coli K12, E. coli K12 JA221, E.

coli K12 HB101, E. coli K12 RR1, Streptomyces, Streptomyces ambofaciens, Bacillus, Bacillus subtilis, Saccharomyces cerevisiae, emlős sejtek, és növényi sejtek, különösen Angiospermous sejtek.

5 A témában jártas szakember tudja, hogy a találmány szerinti dezoxi-ribonukleinsavat tartalmazó vektorokkal más gazdasejtek is transzformálhatók, és ez a transzformáció is a találmány oltalmi köréhez tartozik.

10 A találmány szerinti eljárás összes kivitelezési változata előnyös. A találmány szerinti dezoxi-ribonukleinsav-szekvenciák, klónozó vektorok és transzformánsok közül azonban egyesek még előnyösebbek. Előnyös dezoxi-ribonukleinsav-szekvencia például a

15 pIT123 plazmid 1,3 kb nagyságú BamHI-BglII fragmense. Ennek bázis-szekvenciája a következő:

CCT 1 1 1

GAA

1 1 1

CTC 1 1 1

ACC 1 1 1

GCG

1 1 1

ACG

1 1 I

TCT

1 1 1

GTC

1 1 f

GAG

1 1 1

AAG

1 1 1

1 1 1 GGA

i 1 1

CTT

1 1 1 GAG

1 1 I

TGG

1 1 1 CGC

1 1 1 TGC

! 1 1 AGA

1 1 1 CAG

1 1 I

CTC

1 1 1 TTC

TTT

l t i

CTG 1 1 1

ATC

1 1 I

GAA

1 i 1

AAG

1 t 1

TTC

1 1 1

GAC

f 1 I

AGC

1 1 i

GTC

1 1 1

TCC

1 1 1

GAC

1 1 1

CTG

ATG

1 1 1

i 1 i

AAA

1 1 1 GAC

1 1 1 TAG

1 1 1 CTT

1 I 1

TTC

1 1 1 AAG

! 1 l

CTG

1 1 1 TCG

1 i 1

CAG

1 1 1 AGG

1 1 1 CTG

i 1 1

GAC

1 1 I

TAC

CAG

i i i

CTC

i i i

TCG

1 1 1

GAG

i i i

GGC 1 1 1

GAA

1 1 1

GAA

1 I 1

TCT

1 1 1

CGT

1 1 1

GCT

1 1 1

TTC

1 1 1

AGC

1 1 i

TTC

1 1 i

1 I I

GTC

1 1 1 GAG

1 i i

AGC

1 i 1

CTC

1 1 1 CCG

1 1 1 CTT

1 1 1 CTT

1 1 1 AGA

1 1 1 GCA

1 1 1 CGA

1 1 ! AAG

1 1 i

TCG

1 1 1 AAG

GAT

i i i

GTA

1 i 1

GGA

1 1 1

GGG

i i i

CGT

1 1 1

GGA 1 1 1

TAT

1 1 1

GTC

1 i 1

CTG

1 1 i

CGG 1 1 1

GTA

I I 1

AAT

i 1 1

AGC 1 1 1

1 1 I

CT A

1 1 1 CAT

I 1 I

CCT

1 i i

CCC

1 1 1 GCA

1 1 1 CCT

1 1 1 ATA

1 I I

CAG

1 i I

GAC

1 1 i

GCC

1 I 1

CAT

1 1 1 TTA

1 1 1 TCG

TGC

i i i

GCC

i 1 1

GAT

1 1 (

GGT

i f i

TTC

TAC

1 í 1

AAA

t 1 t

GAT

1 1 1

CGT

1 1 i

TAT

1 1 1

GTT 1 1 1

TAT

1 1 1

CGG

i 1 1

i 1 1

ACG

l 1 i

CGG

1 ! i

CTA

1 i i

CCA

i 1 1

AAG

1 1 1 ATG

! 1 i

TTT

i 1 1

CTA

1 1 1 GCA

1 1 1 ATA

1 1 1 CAA

1 1 1 ATA

1 i 1

GCC

CAC

1 t 1

TTT

1 I 1

GCA

1 1 i

TCG

i i i

GCC

1 I 1

GCG 1 1 1

CTC

1 1 1

CCG

1 1 1

ATT

1 1 1

CCG

1 1 1

GAA

1 1 1

GTG

1 I 1

CTT 1 1 1

1 I 1

GTG

1 1 I

AAA

1 ! i

CGT

i 1 1

AGC

i 1 1

CGG

1 1 1 CGC

1 I 1

GAG

1 1 I

GGC

1 1 1 TAA

1 1 1 GGC

1 1 1 CTT

1 1 1 CAC

1 1 1 GAA

GAC

i i i

ATT

1 1 t

GGG

1 i 1

GAA 1 ! 1

TTC

t 1 1

AGC 1 1 1

GAG

1 1 1

AGC

t 1 1

CTG

1 1 1

ACC 1 1 1

TAT

1 1 1

TGC

1 1 1

ATC

1 1 1

1 1 1 CTG

1 1 1 TAA

1 ! i

ccc

1 1 1 CTT

1 1 1 AAG

1 1 1 TCG

I 1 I

CTC

1 I 1

TCG

1 I 1

GAC

1 1 1 TGG

1 1 1 ATA

1 1 1 ACG

1 1 1 TAG

TCC

1 1 i

CGC 1 1 1

CGT

1 1 1

GCA

i t t

CAG

i 1 1

GGT

1 I 1

GTC

1 I I

ACG

t 1 1

TTG

1 1 1

CAA

1 í 1

GAC

1 t 1

CTG

i 1 i

CCT

1 i I

1 1 i

AGG

1 1 I

GCG

1 1 1 GCA

i i i

CGT

I 1 1

GTC

1 i 1

CCA

1 1 1 CAG

1 1 I

TGC

1 1 1 AAC

1 i 1

GTT

i 1 1

CTG

I 1 i

GAC

1 i 1

GGA

GAA

1 i i

ACC 1 1 1

GAA

i 1 1

CTG

CCC 1 1 1

GCT

i 1 1

GTT 1 1 1

CTG 1 1 1

CAG

1 \ l

CCG

i 1 1

GTC

1 1 1

GCG

1 1 1

GAG

i i i

1 1 1 CTT

1 1 1 TGG

1 1 1 CTT

1 1 1 GAC

1 I 1

GGG

1 1 1 CGA

I 1 1

CAA

1 1 1 GAC

1 1 1 GTC

i 1 1

GGC

1 1 1 CAG

i 1 1

CGC

CTC

GCC 1 1 1

ATG 1 1 1

GAT

I 1 1

GCG

i i i

ATC

I 1 1

GCT

1 i 1

GCG

t 1 1

GCC 1 1 1

GAT 1 1 1

CTT

1 1 I

AGC 1 1 1

CAG 1 1 1

ACG 1 1 1

1 1 ! CGG

1 1 I

TAC

1 1 1 CTA

i i i

CGC

i 1 i

TAG

1 1 1 CGA

1 1 1 CGC

1 I I

CGG

1 1 1 CTA

1 1 1 GAA

1 1 1 TCG

1 1 1 GTC

1 1 1 TGC

AGC

1 1 1

GGG 1 1 1

TTC

1 1 i

GGC

i i i

CCA

1 i 1

TTC

1 1 1

GGA 1 1 1

CCG 1 1 1

CAA

t 1 1

GGA

1 1 1

ATC

i i 1

GGT

i t 1

CAA 1 1 1

1 1 1 TCG

1 1 I

ccc

I 1 I

AAG

i i i

CCG

1 I 1

GGT

1 1 1 AAG

1 1 1 CCT

1 1 1 GGC

i I 1

GTT

1 1 1 CCT

1 I 1

TAG

i 1 i

CCA

1 1 1 GTT

TAC 1 1 1

ACT

i 1 1

ACA 1 1 1

TGG

I f 1

CGT

i 1 1

GAT

1 1 1

TTC

1 1 1

ATA

1 1 1

TGC 1 1 1

GCG 1 1 1

ATT

i ! 1

GCT

1 1 i

GAT

i i i

1 1 1 ATG

1 1 1 TGA

1 1 1 TGT

i 1 1

ACC

i 1 1

GCA

1 ! I

CTA

1 1 1 AAG

1 1 1 TAT

1 1 1 ACG

1 1 1 CGC

1 l l

TAA

l 1 1

CGA

i i I

CTA

7