200257. lajstromszámú szabadalom • Eljárás rovarpatogén fonálférgek tömegtenyésztésére és biológiai védekezőszerként való alkalmazásukra
7 HU 200257 A 8 2. példa 5,0 g nátrium-kloridból és 10,0 ml 1 mólos, pH 6,5-ös Sprensen-féle foszfátpuffer-ol- 5 datból desztillált vízzel 1000 ml sóoldatot készítünk. Sterilizálás után az oldat 90 ml-éhez 5,0 ml defibrinált sertésvért és 5,0 g tojássárgája-port keverünk, majd a továbbiakban az 1. példa szerint járunk el. 10 3. példa 5. példa A Neoaplectana bibionis fonálféreg-fajt tenyésztjük. A sóoldatot a 2. példa szerint készítjük el, de 10 g nátrium-kloridot adunk hozzá és pH-ját 7,0-re állítjuk be. A sóoldatban literenként 50 g szárított pékélesztöt, 100 g húskivonatot (peptont) és 30 g teljes tejport homogénre keverünk. Előfermentéljuk 72 órán át, majd a továbbiakban a 3. példa szerint járunk el. A hozam 2,0-2,8 millió infektiv lárva egységenként. Az 1. példa szerinti sóoldat 90 ml-éhez 5,0 ml marhaszérum és 5 g friss tojássárgája keverékét adjuk. Az előfermentált tápból 50 ml-t oszlatunk el 2000 cm2 hordozófelületen. A tenyészegységek 5 liter űrtartalmú műanyag dobozok, amelyeket 100 000 Neoapleotana glaseri infektiv lárvával oltunk be. A tenyésztés időtartama 22 °C-on 18 nap, ezután az infektiv lárvákat az 1. példában ismertetett módon kinyerjük a tenyészetből. A hozam 2,5-4 millió infektiv lárva tenyészegységenként. 4. példa Neoaplectana carpocapsae 1. példa szerinti tenyészetéhez a 10. napon életciklust befolyásoló anyagot adunk. Ennek elkészítése a következő. A viaszmoly 5. stádiumú hernyóit a fonálféreg infektiv lárváit tartalmazó nedves szűrőpapírra helyezzük, ahol azok legkésőbb 48 órán belül elpusztulnak és testükben megindul a fonálférgek szaporodása. A tetemeket párás környezetben tartjuk. Egy hét múlva 20 hernyótetemet késes homogenizátorral 10 ml steril fiziológiás sóoldatban eldolgozunk, majd a homogenizátumot ultrahanggal kezeljük és 5 órán át állni hagyjuk szobahőn. Centrifugálás után az így elkészült oldat 1-1 ml-ét beporlasztjuk a tenyészedényekbe. A tenyészeteket tovább inkubáljuk és a 16. napon termeljük ki. A hozam egységenként 1,2-1,8 millió infektiv lárva. ^ 6. példa 100 ml 1. példa szerinti sóoldatban 10 g tojássárgája-port homogénre keverünk és azonnal a hordozófelületre visszük. A te- 20 nyészegységeket a Heterorhabditis heliothidis infektiv lárváival oltjuk (10 000/edény), 25 °C-on 8 napig tartjuk. A kimosás az ismertetett módon történik. A hozam 1,8-2,2 millió infektiv lárva egységenként. 25 7. példa A Neoaplectana carpocapsae és egy He- 30 terorhabditis sp. (E2 jelzésű hazai izolátum) infektiv lárváinak tiszta szuszpenzióiból meghatározott arányú keverékeket készítünk. A keverékekből annyit juttatunk egy-egy 100 mm átmérőjű Petri-csészébe helyezett 35 szűrőpapírra, hogy az infektiv lárvák száma 2000 legyen. A csészékbe 10-10 viaszmolyhernyót helyeztünk, 22 °C-on, páradús környezetben tartottuk és naponta regisztráltuk a hernyók elhullását. Minden keveréket 5 is- 40 métlésben vizsgáltunk. Az I. táblázat mutatja be az eredményt (elhullás %). 45 I. táblázat Keverék aránya N. carp. Hét. sp. 1. Nap 2. o k 3. s z 4. á ma 5* 7. 100 0 68 96 100 _ _ 10 90 18 30 64 80 88 100 20 80 22 42 76 82 100-30 70 26 38 80 92 100-40 60 40 70 88 100--50 50 52 80 90 100--0 100 0 18 40 76 84 100 6
