200192. lajstromszámú szabadalom • Eljárás GRF-analóg peptidek előállítására
HU 200192 B Arg(X6)-Ri2M(X6 vagy X7)-Ri3Ícu-Gly-Gln(X5)Rl7-Rl8(X>/^Arg(X^-Lys(X>Leu-I\23-R24(X vagy X5)-R2s(X3)-Ile-R27-R28(X4 vagy X5)-X9, melyekben Xi jelentése vagy hidrogénatom vagy alfaamino védőcsoport. Az Xi-gyel jelzett alfa-amino védőcsoportok hasznosként ismertek a polipeptidek lépésenként! szintézisében. Az Xi-ként használható alfa-amino védőcsoportok osztályai a következők 1) aromás uretán-típusú védőcsoportok, például a fluorenil-metiloxikarbonil (FMOQ-csopart, benziloxikarbonil (Z)- és helyettesített Z-csoport, úgymint a pklór-benziloxi-karbonil-, p-nitro-benziloxi-karbonil, pbróm-benziloxi-karbonil- és p-metoxi-benziloncsoport, 2) alifás metán-típusú védőcsoportok, úgymint a terc-butiloxi-karbonil (BOQ-, diizopropilmetiloxi-karbonil-, izopropiloxi-karbonil-, etoxikarbonil- és alliloxi-kaibonil-csoportés 3) cikloalkil uretán-típusú védőcsoportok, úgymint a ciklopentiloxikarbonil-, adamantiloxi-karbonil- és ciklohexiloxikarbonil-csoport Az előnyös alfa-amino védőcsoport a BOC, akkor is ha NaMe-helyettesített maradékot alkalmazunk az 1-es helyzetben. X jelentése hidrogénatom, vagy a His imidazol nit-. rogénjének védőcsoportja, például Tos. X2 megfelelő védőcsoport lehet a Tyr fenolos hidroxil-csoportjának, úgymint tetrahidrőpiranil-, tercbutil-, tritil-, Bzl-, CBZ-, 4-Br-CBZ és 2,6-di-ldórbenzil (DCB)-csoport X2 lehet hidrogénatom, ami azt jelenti, hogy nincs oldallánc védőcsoport az ebben a pozícióban lévő aminosav-maradékon. X3 jelentése hidrogénatom vagy az Asp vagy Glu karboxil-csoportjához megfelelő észter-képző védőcsoport, például benzil (OBzl)-, 2,6-diklór-benzil-, metil- és etil-csoport. X4 jelentése a Thr vagy Ser hidroxil-csoportjának megfelelő védőcsoport, úgymint acetil-, benzoil-, teic-butil-, tritil-, tetrahidropiranil-, Bzl-, 2,6-diklórbenzil- és CBZ-csoport Az előnyben részesített védőcsoport a Bzl. X4 lehet hidrogénatom, ami azt jelenti, hogy nincs védőcsoport a hidroxil-csoporton. Xs jelentése hidrogénatom vagy az Asn vagy Glu ' oldalláncbeli amido-csoportjának védőcsoportja. Előnyösen xantil (Xan)-c söpört. X$ jelentése az Arg guanidino-csoportjának védőcsoportja, úgymint nitro-, tos-, CBZ-, adamantiloxikarbonil- és BOC-csoport, vagy hidrogénatom. X7 jelentése hidrogénatom vagy a lizin oldalláncúban lévő amino-csoport megvédésére alkalmas védőcsoport Az oldalláncban lévő aminocsoport megvédésére alkalmas a 2-klór-benzoiloxi-karbonil (2-C1- Z)-, Tos-, terc-amiloxi-karbonil- és BOC-csoport. Xs jelentése hidrogénatom, vagy az előzőekben általánosan specifikált megfelelő oldallánc védő csoport A metionint adott esetben védhetjíik oxigénnel, de előnyös, ha védetleniil hagyjuk. Az oldalláncban lévő aminocsoportot védő csoport megválasztása nem kritikus, azzal a kivétellel, hogy általában olyat kell választani, mely szintézis közben az alfa-amino-csoportok védőcsoportjainak eltávolítása közben a helyén marad. Azonban néhány aminosavnál például a hisztidinnél a kapcsolás teljes végrehajtása után a védelem általában nem szükséges, és a védőcsoportok tehernek azonosak. X9 jelentése célszerűen a szilárdfázisú szintézis3 ben a sziláid gyantahordozóhoz kapcsolódó kötés. A szilárd gyantahordozó tág fotelemben szintén védő-. csoportnak tekinthető, és ez lehet bármely, a szakterületen ismert védőcsoport, például -NH-benzhidrila- . min (BHA) gyantahordozó vagy -NH-parametilbenzhidrilamin (MB HA) gyantahordozó. Ha helyettesfietlen amidra van szükség, a BHA vagy MBHA gyanta használata az előnyös, mivel hasítás után közvetlenül kapjuk az amidol A peptidek szintézisébe» alkalmazott oldalláncvédő csoportok kiválasztásánál a következő szabályokat követjük: a) a védőcsoport előnyösen megtartja védő tulajdonságait és nem hasad le akapcsolás körülményei között, b) a védőcsoport nem reagál a reagenssel és a Xan-csoport kivételével stabil marad a szintézis minden lépésben, az alfa-amino védőcsoport eltávolítására választott körülmények között és c) a kívánt aminosav-sorrendet eredményező szintézis teljes lejátszódása során az oldallánc-védőcsoportnak eltávolíthatónak kell lennie olyan körülmények között, melyek nem okoznak nemkívánatos változást a peptid-láncban. A kiindulási peptideket előállíthatjuk rekombináns DNS eljárással is, előnyösen azonban a sziláid fázisú szintézissel nyerjük, célszerűen Merrifield [lásd L Am. Chem. Soc- 85.2149 (1963)] általános módszerével jóllehet más, az előzőkben említett ismert, egyenértékű kémiai szintézist is alkalmazhatunk. A szilárd-fázisú szintézist a peptid C-terminális végétéi kezdjük, egy alfa-amino védett aminosavat észterkötéssel klórmetilezett vagy hidroximetil gyantához, vagy amid-kötéssel BHA vagy MBHA gyantához kapcsolva. A hidroximetil-gyanta előállítását Bordánszky és munkatársai íiják le íChem. Ind. (London), 3S. 1597—98 (1966)]. A klórmetilezett gyanta kereskedelmi forgalomban van előállítója a Bio Rád Laboratories, Richmond, California, és Lab. Systems, Inc. Az ilyen gyanta előállítását Stewart és munkatársai firják le ["Solid Phase Peptide Synthesis” (Freeman and Co., San Francisco, 1969), Chapter 1, 1—6. oldal]. A BHA és MBHA gyanta-hordozók ugyancsak kereskedelmi forgalomban vannak. A Boc- vagy Xan-csoporttal védett C-terminális aminosavat, például aszparagint kapcsoljuk előszór a klórmetilezett gyantához, K. Horiki és munkatársai módszerével [Chemisty Letters 165—168 (1978)], melynek során kálium-fluoridot használunk DMF- ben, körülbelül 60 ‘C-on 24 órán át kevertetve az elegyek A BOC-védett aminosavnak a gyanta hordozóhoz való kapcsolását követően az alfh-amino védőcsoportot eltávolítjuk, trifluorecetsavat (TEA) használva diklórmetánban, vagy csak TFA-t használva. A védőcsoport eltávolítását 0 *C és szobahőmérséklet közötti hőmérséklettartományban végezzük. Más hasító reagenseket, például sósavas dioxánt vagy specifikus alfa-amino-védőcsoportok eltávolítására alkalmazott reagenseket is használhatunk, Schroder és Lubke szerint [The Peptides", L 72—75 (Academic Press 1965)]. Az alfa-amino védőcsoportok eltávolítása után a megmaradó és adott esetben oldalláncban védett aaminosavakat lépésenként a kívánt sorrendben kapcsoljuk össze, Így kapjuk az előzőkben definiált intermedier vegyületet, vagy egy alternatívaként, néhány aminosavat előzőleg, a szilárd fázisú reaktorhoz 4 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
