200191. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új dipeptidek előállítására
HU 200191 B 13 14 A mólkoncentráció 6,5x10'; B 2,9x10'; C 2,5xl0'9 D 2,4xl0‘9 E 6,6x10'; F 3,7x10'; G 2,9xl0'9 6. példa Renin inhibitor hatás humán magas reninszintű plazmában 350 pl, 14 mM EDTA x 2 Na-t és 03% neomicinszulfátoí tartalmazó 0,5 M foszfát puffá- (pH= 7,0), 50 pl 20 mM-os L-fenilalanil-L-alanü-L-prolin angiotcnzin átalakító enzim inhibitor és a találmány szerinti aminosav-származékot tartalmazó 100 pl humán magas reninszintű plazmához adjuk. Az elegy 201 pljét jeges fürdőre helyezzük 4 *C hőmérsékleten tartva és a megmaradó 800 p-t 60 percig inkubáljuk 37 *C-on, vízfürdőn. 200 pl inkubált elegyet jégfürdőn befagyasztunk és a keletkezett angiotenzin I mennyiséget (A) radioimmunvizsgálattal meghatározzuk. A jeges fürdőn 4 ‘C-on elhelyezett elegy angiotenzin I tartalmát (B) szintén radioimmunvizsgálattal határozzuk meg. Kontrollként ugyanilyen eljárást hajtunk végre, a 100 pl dimetil-szulfoxidos aminosav hatóanyag oldat helyett 100 pl dimetil-szulfoxidot alkalmazva. A nettó mennyiséget A és B különbsége adja meg. Az inhibitor (gátló) hatást az alábbi egyenlet alapján számoltuk ki: Gátlás %= [(Az angiotenzin I mennyisége a konrollban - Az angiotenzin I mennyisége a találmány szerinti vegyületet tartalmazó elegyben)/Az angiotenzin I mennyisége a kontroliban] x 100 Az 50%-os gátlást kifejtő mólkoncentráciőt (ICso) a kapott gátlás értékekből számoltuk és az alábbiakban adjuk meg. mókát kis lefogó székekbe helyeztük és a femorális artériából katéteren keresztül 20,40,60,120,180 és 300 perces intervallumokban vért vettünk. Az összegyűjtött vérmintákat 1200 g 15 percig 5 centrifugáltuk, 4*C hőmérsékleten. A plazma 200pljét 60 percen át 37 ’C-on inkubáltuk és a plazmái renin aktivitást radioimmun-vizsgálattal mértük. A találmány szerinti A vegyületet hfg sósavban oldottuk és orálisan beadtuk egy katéteren keresztül, 30 10 mg/kg egyszeri dózisban. A kapott eredmények alább láthatók: A plazmais Felhasznált renin akúvitá állatok %-os gátlása száma !5----------------------------------------------------------:------20 perccel beadás után 68,2 3 40 perccel beadás után 88,1 3 60 perccel beadás után 87,1 3 120 perccel beadás után 88,1 3 180 perccel beadás után 79,6 3 300 perccel beadás után 53.4 2 8. példa Vérnyomáscsökkentő hatás selyemmajomban A kísérletet közönséges selyemmajomnál K. G. 25 Hofbauer és társai (Clinical and Experimental Hypertension, Vol. A5, Nos. 7 8 (1983), p 1237-2147) módszere szerint hajtottuk végre. Közönséges selyemmajomnak furoszemidet adtunk be háromszor, a magas reninszint kialakítása cél- 30 jaból. Az utolsó furoszemid dózis beadása után a harmadik napon megmértük az éber selyemmajmok vérnyomását Vérnyomásmérés 35 460 g súlyú éber hím selyemmajmot kis lefogó székbe helyeztünk. A vérnyomást pretismograph-fal, tail cuff módszerrel mértük. A C vegyületet híg sósavban feloldottuk és orálisan, 30 mg/kg dózisban adtuk be, katéter segítségével A kapott eredmények 40 alább láthatók. * 1 Vegyidet ICso A (mólkoncentráció) 1,0x10'* B 2,6xl0’7 C 6,8xl0'9 D 4,7xl0"9 E 3,0x10* F l,3xl0'7 G 4,lxl0'9 2. példa Renin inhibitor hatás plazmán, közönséges selyemmajom esetében 55 A kísérletben közönséges selyemmajmot használtunk, az alábbi irodalomban leírtak szerint: K. G. Hofbauer et al., Clinical and Experimental hypertension, Vol A5, Nos. 7 8 (1983), p. 1237-1247. Furoszemidet adtunk be közönséges selyemma- 60 jómnak, orálisan, háromszor 15 mg/kg/nap dózisban, a magas reninszint létrehozása céljából. Az állatok sószegény diétán voltak tartva. Mérés A 335-375 g-os éber hím és nőstény selyemmaj- 65 Beadás utáni idő Vérnyomás (órákban) (Hgmm) Kontroll 893 0,5 78,0 1 73,3 2 66,0 3 71,0 5 71,8 7 71,7 SZABADALMI IGÉNYPONT 1. Eljárás (I) általános képletű dipeptidek, ahol His jelentése L-hisztidil-csoport, X jelentése 1-5 szénatomos, egyenes- vagy elágazó láncú alkoxicsoport, mely adott esetben egy vagy két halogénatommal szubsztituált; 1-5 szénatomos, egyenes- vagy elágazó láncú alkil-amino-csoport, 4-6 szénatomos cikloalkoxicsoport; vagy morfolinocsoport; valamint gyógyászatiig alkalmazható savaddíciós sóik előállítására, azzal jellemezve, hogy egy (II) képletű vegyületet—ahol (S) jelentése S-konfíguráció, Y jelentése hidroxil- vagy hidrazino-csoport- va-8
