199882. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, vazopresszin antagonista hatású, polipeptidek és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 199882 B 2 nyersterméket forró etanolban oldjuk, szűrjük, majd vákuumban bepároljuk. így a nyers hidantoint nyerjük. MS: (M +H)+ = 264. A tisztítatlan hidantoint 12,0 g, 38 mmól bárium-hidroxidhexahidrátot tartalmazó vízben szuszpendáljuk és lezárt bombában 96 órán át 170 °C-on tartjuk. A reakcióelegyet lehűtjük, vízzel meghígítjuk és szűrjük. A szűrletet BioRad AG 50W — X8 töltetű ioncserélő oszlopra visszük, és a kívánt terméket az oszlopról 1 n vizes ammónium-hidroxiddal eluáljuk. Az ammónium-hidroxid eluens lepárlása után 1,1 g cím szerinti aminosavat nyerünk. MS: (M + H) + = 258. Ezt a vegyületet triviális néven 6,6-ciklopentametilén-2-aminoszuberinsavként (Pas) nevezik. F) 2-D,L-Boc-amino-5-[(l-karboxi-metil)-ciklohexill-pentánsav előállítása Az E) lépésben előállított aminosavat 45 ml 1 n nátrium-hidroxid-oldatban és 45 ml terc-butanolban oldjuk és az elegyet szobahőmérsékleten 48 órán át 980 mg, 4,5 mmól di(terc-butil)-dikarbonáttal reagáltatjuk. A reakcióelegyet hexánnal mossuk, nátrium-hidrogén-szulfáttal megsavanyítjuk, majd etil-acetáttal extraháljuk. Az egyesített szerves fázisokat szárítjuk, szűrjük, majd bepároljuk. így 1,5 g cím szerinti vegyületet nyerünk. G) 2-D,L-Boc-amino-5-f(l-karbometoxi-metiD-ciklohexill-pentánsav metil-észter előállítása Az F) lépés szerint előállított 1,5 g Boc-disavat metilén-kloridban oldjuk és 1 °C-on feleslegben lévő éteres diazo-metánnal reagáltatjuk. A feleslegben lévő diazo-metánnak ecetsavval való elbontása után az oldatot vákuumban bepároljuk. A nyers észtert flash kromatográfiás eljárással, szilikagélen, 20%> etil-acetát/hexán eluens alkalmazásával tisztítjuk. így 56%-os hozammal 900 mg cím szerinti terméket nyerünk. !H-NMR (CDCI3): 5,23-4,87 (m, 1H), 4,50- -4,10 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,67 (s, 3H), 2,30 (s, 2H), 1,47 (s, 9H) és 1,42 (széles s, 16H). H) 2-D.L-Boc-amino-5-[( 1-karbometoxi-metil)-ciklohexill-pentánsav előállítása 1,135 g, 2,94 mmól, á G) lépés szerint előállított Boc-diésztert 16 ml dioxánban oldunk és az oldathoz 5 “C-on 3,2 ml 1 n vizes nátrum-hidroxid-oldatot adunk. A reakcióelegyet azonnal szobahőmérsékletre melegítjük és 4 órán át keverjük. Ezután a reakcióelegyet 3 n hidrogénkloriddal pH = 2-re savanyítjuk, majd vákuumban bepároljuk. A visszamaradó anyagot vízzel meghígítjuk, majd etil-acetáttal extraháljuk. Az egyesített szerves fázisokat szárítjuk, szűrjük, majd bepároljuk. A visszamaradó anyagot flash kromatográfiás eljárással, szilikagélen, 5-10% metanol/kloroform eluenssel tisztítjuk. MS: (M + H) + = 372; ^-NMR (CDCl3): 8,02 (széles s, 1H), 5,28-5,00 (m, 1H), 4,47- - 4,07 (m, 1H), 3,65 (s, 3H), 2,30 (s, 2H), 1,47 (s, 9H) és 2,00-1,23 (m, 16H). Aminosav I) 2-D'L-Boc-amino-5-1 (l-benzil-oxi-karbonilmetil)-ciklohexill-pentánsav-benzil-észter előállítása 1,34 g, 3,75 mmól az F) lépés szerint előállított Boc-disavat 30 ml metilén-kloridban oldunk, 1,94 ml, 18,75 mmól benzil-alkoholt, 1,01 g, 8,25 mmól dimetil-amino-piridint és 1,70 g, 8,25 mmól N,N’-diciklohexil-karbodiimidet adunk hozzá szobahőmérsékleten és az elegyet szobahőmérsékleten 72 órán át keverjük. A reakcióelegyet ezután megszűrjük, vákuumban bepároljuk, a visszamaradó anyagot etil-acetátban oldjuk, 3 n hidrogén-kloriddal mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk, majd vákuumban bepároljuk. A visszamaradó anyagot flash kromatográfiás eljárással szilikagélen, 15% etil-acetát/hexán eluens alkalmazásával tisztítjuk, így 63%-os hozammal 1,27 g (I) képletű terméket nyerünk. 1H-NMR (CDCI3): 7,35 (s, 10H), 5,15 (d, J = 2,4Hz, 2H), 5,07 (s, 2H), 5,05-4,70 (m, 1H), 4,50-4,05 (m, 1H), 2,27 (s, 2H), 1,45 (s, 9H) és 2,00-1,03 (m, 16H). J) 2-Boc-D,L-amino-5-f(l-benzil-oxi-karbonil-metil)-ciklohexin-pentánsav előállítása Az 1,27 g, 2,36 mmól (I) képletű Boc-diésztert 15 ml dioxánban oldjuk és 2,6 ml 1 n nátriumhidroxid-oldattal szobahőmérsékleten, argongáz atmoszférában 4 órán át reagáltatjuk. Ezután a reakcióelegyet 3 n hidrogén-kloriddal pH = 2-re savanyítjuk, majd vákuumban bepároljuk. A visszamaradó anyagot etil-acetátban oldjuk, 3 n hidrogén-kloriddal mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk, majd vákuumban bepároljuk. A visszamaradó anyagot flash kromatográfiás eljárással szilikagélen, 5% metanol/kloroform eluens alkalmazásával tisztítjuk. így 1,03 g cím szerinti terméket nyerünk. MS: MH+ = 448; 1H-NMR (CDCI3): 7,33 (s, 5H), 5,07 (s, 2H), 5,20-4,80 (m, 1H), 4,42-4,05 (m, 1H), 2,32 (s, 2H), 1,43 (s, 9H) és 2,08-1,07 (m, 16H). 2, referencia példa Lineáris peptid köztitermékek szintézise A) 2-Boc-amino-5-f(l-benzil-oxi-karbonil-metil)-ciklohexil]-pentanoil-prolil-(N-Tos)-arginil-BHA-gyanta előállítása Manuális peptidszintetizátor 30 ml-es reakcióedényében 0,96 g, 0,5 mmól, BHA-gyantát 25 ml metilén-kloridban 4 órán át duzzasztunk. Ezután egymást követően összekapcsolunk védett argininnel, prolinnal, valamint 2-D,L-Boc-amino-5- [ ( l-benzil-oxi-karbonil-metil)-ciklohexilj-pentánsawal, kapcsoló-reagensként DCC-t, HBT-t vagy DMPA-t (4-dimetU-amino-piridin) alkalmazunk és a reagáltatást dimetil-formamid és metilén-klorid elegyében végezzük. Az alkalmazott reagensek mennyisége és mólaránya a következő: Kapcsoló reagens Katalizátor HBT 405 mg HBT 405 mg DMAP183 mg Boc-Arg (Tos) 642 mg DCC 5 ml/0,3 mól/1 oldat Boc-Pro 390 mg DCC 5 ml/0,3 mól/1 oldat Boc-D,L-Pas (Bzl) 900 mg DCC 5 ml/0,3 mól/1 oldat 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6
