199881. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vazopresszin antagonista hatású új bázikus peptidek előállítására
1 HU 199881 B 2 juk az oszlopról, majd az eluátumot szárazra pároljuk. Az ily módon kapott (l-(//3-merkapto-0,0-ciklopentametilén/-propionsav), 2-(0-etil)-D-tirozin-4-valin, 7-(l,5-diamino-pentán), 7- -dezprolin, S-dezarginin-9-dezglicinamid]-vazopresszint preparatív nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással (5 ß Ultrasphere ODS alkalmazásával) kétszer tisztítva 13%-os hozammal 4,7 mg tiszta terméket nyerünk. A kapott termék szerkezetét FAB — MS vizsgálattal [(M + H)+ = 911] és aminosavanalízissel (Asp= 1,00; Cys= 0,46; Val= 1,01; Tyr= 0,90; Phe = 0,99) azonosítottuk. A termék tisztaságát nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással (5 ß Ultrasphere ODS, 4,6x250 mm, 0,05 mól/1 KH2P04/CH3CN 60:40, K1 = 16,7 perc, 0,05 mól/1 KH2PO4/CH3CN 80:20-50:50 gradiens, K1 = 32,3 perc) igazoltuk. 9. példa 13,0 g (100 mmól) diamino-heptánt 100 ml metilén-kloridban oldunk, majd egy óra leforgása alatt hozzáadjuk 8,72 g (40 mmól) di(terc-butil)-dikarbonát 10 ml metilén-kloridban készült oldatát. Az elegyet éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük, majd a képződött fehér csapadékot kiszűrjük, 1 □ ammónium-hidroxidban oldjuk és az oldatot etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetátos extraktumot vízzel mossuk, majd szárazra pároljuk. A visszamaradó anyagot 1 n nátrium-hidrogén-szulfátban oldjuk, etil-acetáttal extraháljuk, majd ammónium-hidroxiddal pH= 8 — 9 -re lúgosítjuk. Ezt az oldatot etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetátos fázist vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk, majd szárazra pároljuk. íly módon halványsárga, állás közben megszilárduló olajat nyerünk. A kapott szilárd anyagot hexánnal eldörzsöljük, szűréssel összegyűjtjük és levegőn szárítjuk. íly módon 2%-os hozammal 350 mg terméket nyerünk. A kapott termék olvadáspontja 55-58 °C. FAB—MS és proton NMR eljárással vizsgálva igazoltuk, hogy a kapott termék szerkezete a Boc-diamino-heptánénak megfelelő. 25 mg (27 junól), az 1. példa szerint előállított Pmp-D-Tyr(Et)-Phe-Val-Asn-Cys-Pro-OH 5 ml dimetil-formamidban oldunk. Ehhez hozzáadunk 31 mg (135 /mól, 5 ekvivalens) Boc-diamino-heptánt, 18,3 mg (135 /mól) HBT-t és 21 ß\ (135 /mól) diizopropil-karbodiimidet. Az elegyet éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük, majd az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A visszamaradó anyagot kloroformban oldjuk, és az oldatot 1 n nátrium-hidrogénszulfáttal, majd telített sóoldattal mossuk. Ezután az oldatot szárazra pároljuk, kloroformban néhányszor felvesszük és újra szárazra pároljuk. A visszamaradó anyagot 4 n hidrogén-klorid/dioxán elegyben oldjuk és szobahőmérsékleten 30 percig keverjük. Ezután az oldószert lepároljuk, a visszamaradó anyagot kloroformban néhányszor felveszszük és újra bepároljuk, majd végül vízben oldjuk. A vizes oldat pH-ját jégecettel 3,5-re állítjuk, majd az oldatot BioRex-70 (H + ) oszlopra visszük. Az oszlopot vízzel mossuk, majd piridin-acetát-pufferrel (30% piridin, 6% ecetsav) eluáljuk. Az eluátumot szárazra pároljuk, a viszszamaradó anyagot vízben felvesszük, majd liofilizáljuk. A kapott peptidet, az [l-(/£-merkapto-0,/î-ciklopentametilén/-propionsav)-2-(O-etil)-D-tirozin-4-valin-8-dezarginin-9-dezglicinamid-8-(l,7-diamino-heptán)]-vazopresszint 1%-os ecetsavban oldva P-2 gélen gélszűréssel, majd preparatív nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással tisztítjuk. 10. példa Parenterális egységdózis készítmények előállítása 0. 10 mg, a 3., 4. vagy 5. példa szerinti heptapeptidet steril, száraz por formájában tartalmazó készítményt parenterális injekcióhoz a következőképpen készítünk: 0,5 mg peptidet 1 ml 20 mg mannitot tartalmazó vizes oldatban oldunk. Az oldatot steril körülmények között 2 ml-es ampullákba szűrjük és liofilizáijuk. A port intramuszkuláris vagy intravénás injekcióként való beadás alkalmazás előtt rekonstituáljuk. Az injekcióval ödémában szenvedő, anti-ADH hatásmechanizmusra reagáló beteget kezelünk. Az injekciót ismételten, naponta 1 — 5 alkalommal, vagy intravénásán csepp-infúzióban adjuk be. Nazálisán adagolható készítmény 25 mg finoman aprított, találmány szerint előállított heptapeptidet, például a 4. példa szerinti peptidet, 75 ml benzil-alkohol és 1,395 g szuszpendálószer elegyében, szuszpendálunk. Szuszpendálószerként például magasabb szénatomszámú zsírsavak szemiszintetikus gliceridjeinek kereskedelmi forgalomban kapható elegyét alkalmazzuk. A szuszpenziót 10 ml térfogatú aeroszolos tartályba tesszük, amely adagoló pumpával záródik és aeroszol hajtóanyaggal van töltve. A tartály 100 egységdózisnyi készítményt tartalmaz, mellyel az ödémában szenvedő beteget orron át naponta 1-6 alkalommal kezeljük. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az új (I) általános képletű bázikus peptidek előállítására — a képletben A jelentése -NH-(CH2)n-NH2 vagy -NH(CH2)n-NH-C( = NH)-NH2; X jelentése D-Tyr vagy D-Tyr(Alk); P jelentése L-Pro vagy vegyértékkötés és n értéke 2 — 1—, azzal jellemezve, hogy 1) egy adott esetben védett (IV) általános képletű vegyületen gyűrűzárást hajtunk végre — a képletben X és P jelentése a tárgyi körben megadott, Pmp jelentése /3,/3-ciklopentametilén-propionsav, és az -SH csoport ehhez ^-helyzetben kapcsolódik, majd 2) a kapott (II) általános képletű vegyületet adott esetben védett formában lévő HA általános képletű diaminnal reagáltatjuk, A jelentése a tárgyi körben megadott és 3) adott esetben bármely jelenlévő védőcsoportot eltávolítunk, és/vagy 4) kívánt esetben egy A helyettesítőként -NH(CH2)n-NH2 csoportot tartalmazó (I) általános 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
