199879. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hexapeptidek és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 199879 B 2 (3) Valamennyi védőcsoport eltávolítása A peptidláncot a fenti kondenzálás és alfa-amino-védőcsoport eltávolítás megismétlésével meghosszabbítjuk. A kapott nyerstermékről valamennyi védőcsoportot eltávolítjuk, amely bármely szokásos módon, így katalitikus redukcióval, folyékony ammóniával vagy alkálifémmel, illetve savval vagy bázissal vagy hidrazinnal megvalósítható. A megfelelő módszert a védőcsoport típusától függően választjuk meg. Példaként a védőcsoportok hidrogén-fluoriddal történő lehasítását mutatjuk be. 1 g védett polipeptidet hermetikusan zárt HF reaktorban 0,5 ml anizol jelenlétében —15 és 0°C közötti hőmérsékleten mintegy 30 ml hidrogén-fluoridban oldunk. Az elegyet 60 percen keresztül keverjük, majd a hidrogén-fluoridot ledesztilláijuk és a maradékot éterrel mossuk, vízben oldjuk és Amberlite IRA-93 (ecetsavas forma) gyantával kezeljük, majd fagyasztva szárítjuk. így védőcsoporttól mentes nyers peptidet kapunk. (4) A nyers peptid tisztítása A nyers peptid tisztítása bármely szokásos módon, így ioncserés kromatográfiával, gélszűréssel, megoszlásos kromatográfiával, ellenáramú megoszlással és nagynyomású folyadék kromatográfíával megvalósítható. Példaként a nagynyomású folyadék kromatográfiás módszert ismertetjük. 100 mg nyers peptidet Nucleosil 5C18 ioncserélővel töltött 20 x 250 mm méretű oszlopra viszünk és 0,015 tömeg% sósavval (H2O/CH3CN) eluáljuk. A megfelelő frakciókat 210 nm-en végzett UV detektálással választjuk ki, majd a kívánt tiszta peptidet fagyasztva szárítással izoláljuk. A kívánt termék a tisztítási módszertől és a peptid kémiai szerkezetétől függően savaddíciós só, így acetát vagy hidroklorid só formájában is izolálható. Az új hatóanyagok biológiai hatását az alábbi példával mutatjuk be. Metamfetamin antagonista hatás vizsgálata A példában a metamfetaminnal indukált fokozott spontán mozgás gátlását vizsgáljuk. 120 - 200 g tesi.ömegű Wistar típusú hím patkányoknak és 18-25 g testtömegű ddY típusú hím egereknek orálisan vagy szubkután vizsgált hatóanyagot és kontrollként fiziológiai sóoldatot adagolunk. 30 perc vagy 2 óra elteltével intraperitoneálisan metamfetamin-hidrokloridot (Philopon, Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd., Japán) adagolunk. 1 óra elteltével a spontán mozgás mértékét MK-ANIMEX (Muromachi Kikai) berendezés segítségével mérjük. Az új hatóanyagokkal elérhető gátlás mértékét a fiziológiai sóoldattal kezelt patkányok vagy egerek spontán mozgásához viszonyítva az 1. táblázatban adjuk meg. 1. táblázat Hatóanyag Metamfetamin antagonista példaszáma Dózis Gátlás (mg/kgs.c.) (%) 1. 0,4 20,6 2. 2,0 72,3 3. 0,5 57,8 4. 0,1 27,9 5. 0,4 37,3 6. 0,5 50,5 7. 0,5 77,0 neurotenzin 20,0 — A táblázat eredményeiből látható, hogy az (I) általános képletű vegyületekkel kiváltott hatás összehasonlítható az intraventrikulárisan adgolt neurotenzinnel kiváltott hatással, vagyis az új hatóanyagok hatása nagyon nagy. Az új hatóanyagok tehát erős metamfetamin antagonista hatással rendelkeznek intravénás vagy szubkután injekció vagy orális adagolás esetén is. A hatóanyagok tehát sokkal előnyösebben, mint a neurotenzin vagy ennek származékai, mivel azok az in vivo körülmények között mutatott alacsony stabilitás miatt csak nehézkesen adagolhatók. Emellett, az (I) általános képletű hexapeptidek nem okoznak katalepsziát, ami állatkísérletekben az extrapiramidális betegség jellemző szimptómája, amely utóbbi a szokásos antipszichotikus szerek, vagyis dopamin idegrendszer blokkolók klinikai adagolásának mellékhatása. Az új hatóanyagok ilyen hatást nem váltanak ki még akkor sem, ha a metamfetamin antagonista hatáshoz szükséges dózis 200-szorosát adagoljuk. Ez a kép is az új polipeptidek klinikai fontosságát igazolja. Az új hexapeptidek tehát metamfetamin antagonistaként és analgetikumként alkalmazhatók az agy szervi elváltozásaival shizofréniával, valamint aggkori elmebetegséggel összefüggő viselkedési zavarok kezelésére és/vagy javítására. Az új vegyületekkel kezelhető agyi szerves elváltozások közé tartozik az elmebaj, az agyi erek károsodásának következménye, fejsérülés hatására bekövetkező károsodás és más aggkori betegségek. Az új hatóanyagokat gyógyszerkészítmény formájában orálisan vagy parenterálisan adagoljuk. Az új hatóanyagokat tartalmazó gyógyszerkészítmények a szokásos módon előállíthatók, amelynek során a hatóanyagot gyógyszerészeti célra alkalmas vivőanyaggal és/vagy egyéb gyógyszerészeti segédanyaggal keverjük. A segédanyagok típusát az adagolási forma határozza meg, példaként említhetők a töltőanyagok, kötőanyagok, nedvesítőszerek, szétesést befolyásoló anyagok, felületaktív anyagok, hígítószerek és csúsztatószerek. A találmány szerint előállított készítmény kiszerelési formája lehet tabletta, pirula, por, oldat, szuszpenzió, emulzió, granulátum, kapszula, szuppozitírium, injekció (oldat vagy szuszpen5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
