199869. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2'-fluor-nukleozidok és ilyeneket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
t HU 199869 B 2 (C.H. Tann et al.. J. Org. Chem., 50: 3647,1985) 25 ml 5 mmól-os kálium-foszfát pufferban (pH «= 7) szuszpeodálunk, amely még 0,04 t% kálium-azidot is tartalmaz. Ezután 8000 l.U. timidin-foszforilázt és 11100 l.U. purin nukleozid foszforilázt (T.A. Krenilsky, et al.. Biochemistry, 20: 3615, 1981 és a 4.381.444. számú Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás) adagolunk és a reakciókeveréket 37 °C hőmérsékleten keverjük. A 24. napon 8000 l.U. timidin foszforilázt és 5500 l.U. purin nukleozid foszforilázt adagolunk. A 49. napon a reakciókeveréket 250 ml-re hígítjuk 5 mmólos kálium-foszfát puffer adagolásával (pH = 7) amely még 0,04 t% kálium-azidot is tartalmaz. A keverék pH értékét kálium-hidroxiddal 7-re beállítjuk majd 12000 l.U. timidin foszforilázt és 8300 l.U. purin nukleozid foszforilázt adagolunk. A 79. napon az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a visszamaradó anyagot forró vízben oldjuk, két térfogatrész acetonitrilt adagolunk hozzá a protein kicsapására, egy éjszakán át állni hagyjuk majd szűrjük. A szűrietet betöményítjük, a visszamaradó anyagot forró vízben feloldjuk, majd hagyjuk lehűlni 25 °C-ra. A szuszpenziót ezután szűrjük, a szűrletet 2,5x8 cm méretű AG1X2 hidroxid töltetű oszlopra adagoljuk, vízzel majd metanol/víz= 1/1 eleggyel átmossuk és metanol/víz = 9/1 eleggyel eluáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a visszamaradó anyagot kloroform/metanol/víz * 90/10/1 elegyben oldjuk, és 2,5x55 cm méretű szilikagél töltetű oszlopra adagoljuk. Az eluálást kloroform/ /metanol/víz = 90/10/1 eleggyel végezzük, a terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A visszamaradó anyagot vízben oldjuk, liofilizáljuk, amikoris 0,041 g cím szerinti vegyületet nyerünk 0,4 hidrát-tartalom mellett. Elemanalízis a Ci2H16FN504 x 0,4H2O öszszegképletű vegyületre: számított: C: 44,97, H: 5,28, N: 21,85%, nyert: C: 44,97, H: 5,33, N: 21,85%. A termék szerkezetét ‘H-NMR spektrummal igazoltuk (adatokat lásd később). Előzőekben előállított vegyületek NMR-adatai: 2-amino-6-(ciklopropil-amino)-9-(2-dezoxi-2--fluor-/?-D-arabino-furanozil)-9H-purin: ‘H-NMR (200 mHz, Me2SO-d6, 6): 7,76 (d, 1H, H-8, JF8 = 2,5Hz), 7,36 (d, 1H, 6-NH, J -4,3Hz), 6,18 idd, m, H-l\ JF1- 16,9Hz, J =4,2Hz), 5,89 (m, 3H, 6-NH2 és ÍP-OH), 5,07 (látszólagos dt, 1H, H-2’, JF2 = 52,7Hz, J -3,7Hz), 5,04 (t, 1H, 5’-OH, J = 5,7Hz), 4,36 (látszólagos dq, 1H, H-3\ JF3 = 18,lHz), 3,79 (látszólagos q, 1H, H-4’, J = 4,9Hz), 3,60 (m, 2H, H„f8-5’ és Hbél,-5’), 3,03 (m, 1H, N-CH), 0,58 (m, 4H, CH2CH2). 2-amino-9-(2-dezoxi-2-fluor-/?-D-arabino-furanozil)-6-metoxi-9H-purin: *H-NMR (200 mHz, Me^O-d*,, í): 7,94 (d, 1H, H-8, JFg-2,3Hz), 6,50 (s, 2H, 2-NH2), 6,23 (dd, m! H-T, JF1-15,8Hz, J-4,3Hz), 5,90 (d, 1H, 3’-OH, J -4;8Hz), 5,12 (látszólagos dt, 1H, H-2’, JF2= 52 -4Hz, J-3,9Hz), 5,03 (látszólagos t, Ifi, H-5\ J -5,8Hz), 4,37 (látszólagos dq, 1H, H-3\ Jp 3-18,0Hz, J-4,4Hz), 3,96 (s, 3H, 6-OCH3), 3,81 (látszólagos q, 1H, 5 h-4’, J - 4,8Hz), 3,62 (m, 2H, Ha,f<-5' és Hb éta-5’). 2-amino-9(2-dezoxi-2-fluor-/3-D-arabino-furanozil)-6-etoxi-9H-purin: ‘H-NMR (300 mHz, Me^O-d*, S): 7,93 (d, 10 1H, H-8, JF 8 - 2,2Hz), 6,47 (s, 2H, 2-NH2), 6,22 (dd, 1H, H-r, JF1 = 15,7Hz, J = 4,2Hz), 5,91 (d, 1H, 3’-OH, J = 4,l7Hz), 5,11 (látszólagos dt, 1H, H-2’, JF2= 52,7Hz, J-4,0Hz), 5,05 (t, 1H, 5’OH, J = 5,6Hz), 4,43 (m, 3H, 6-OCH2 és H-3’), 15 3,81 (látszólagos q, 1H, H-4’, J-4,8Hz), 3,61 (m, 2H, Half„-5’ és Hbéu-5’), 1,35 (t, 3H, CH3, . J = 7,04Hz). 4. példa 20 Tabletta készítmény A következő A, B és C összetételeknek megfelelő készítményeket úgy állítottuk elő, hogy at összetevőket homogenizálás után povidin oldattal nedvesítettük és granuláltuk, majd hozzáad 25 tűk a magnézium-sztearátot és sajtoltuk. A készítmény Mg/tabletta (a) Hatóanyag 250 150 (b) Laktóz B.P. 210 126 30 (c) Povidon B.P. (d) Nátrium kémé-15 9 nyítő glikolát (e) Magnézium-20 12-sztearát 5 3 35 B készítmény 500 300 (a) Hatóanyag 250 150 (b) Laktóz 150 90 (c) A vicéi PH 101 60 36 40 (d) Povidon B.P. (d) Nátrium kémé-15 9 nyítő glikolát (f) Magnézium-20 12-sztearát 5 3 45 C. készítmény 500 300 Hatóanyag 100 Laktóz 200 Keményítő 50 50 Povidon 5 Magnézium-sztearát 4 359 55 60 65 A következő D és E összetételeknek megfelelő anyagokat az összetevők elkeverése után közvetlenül sajtoljuk. A laktóz tartalmú E készítmény közvetlenül sajtolható típus. D készítmény_____________________mg/tabletta Hatóanyag 250 Eiőgélesített keményítő NF15 148 Magnézium-sztearát 2 400 5
