199847. lajstromszámú szabadalom • Eljárás makrolid vegyületek és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, valamint inszekticid, akaricid vagy nematocid készítmények
1 HU 199847 B 2 eltávolítjuk. A kinyert 25,5 kg sejtet 1 óra hosszat Silverson BX keverőben annyi metanolban keverjük, amennyi a 75 1 teljes térfogathoz szükséges. A szuszpenziót leszűrjük, a szilárd maradékot 35 1 metanollal újra extraháljuk és leszűrjük. Az egyesített, 87 1 szűrletet 40 1 vízzel hígítjuk, és 30 1 petroléterrel 60-80 “C-on extraháljuk. 30 perc múlva a fázisokat egy Westfalia MÉM 1256 típusú centrifugával elválasztjuk, az alsó metanolos fázist 30 1 60-80 °C-os petroléterrel újra extraháljuk 40 1 víz adagolása után. Elválasztás után az alsó fázist 30 1 60-80 "C-os petroléterrel újra extraháljuk. Az egyesített, 85 1 petroléteres fázisokat három fázisban egy Pfaudler 8.8-12v-27 lengőlapátos filmbepárlóban bepároljuk (gőznyomás 0,1 bar, gőzhőmérséklet 20 °C, fűtőgőzhőmérséklet 127 “C). A kapott 9 1 koncentrátumot 2 kg nátrium-szulfáton megszárítjuk, és csökkentett nyomáson, 45 “C-on merevlapátos filmbepárlóban tovább koncentráljuk. A kapott 130 g olajos maradékot kloroformban 190 ml-re feloldjuk, és ezt egy 200 x 4 cm méretű, Merck 7734 silica 60 oszlopra visszük fel. Az oszlopot 500 ml kloroformmal mossuk, és kloroform és etilacetát 3 : 1 térfogatarányú elegyével eluáljuk, mintegy 40 ml frakciót gyűjtünk össze 1400 ml eluátum után. A 32-46. frakciókat egyesítjük, és bepároljuk, így 21,2 g olajat kapunk. A 47-93. frakciókat egyesítjük, bepároljuk, és így 20,1 g olajat kapunk, amelyet kloroform és etil-acetát 3 : 1 térfogatarányú elegyében 50 ml-re oldunk, és egy 200 x 4 cm méretű Merck 7734 silica 60 oszlopra visszük fel, kloroform és etil-acetát 3 : 1 térfogatarányú elegyével eluálunk, mintegy 40 ml-es frakciókat gyűjtünk 1400 ml előeluátum után. A 22-36. frakciókat egyesítjük, bepároljuk, és így 3,1 g olajat kapunk, amelyet az 1. oszlop 32-46. frakciójának termékéhez adunk. Az egyesített olajokat 4 ml forró metanolban oldjuk, hozzáadunk 20 ml forró 2-propanolt, és hagyjuk kristályosodni. A kristályosítás utáni anyalúgot bepároljuk, így olajat kapunk, amelyet azonos mennyiségű metilénkloridban oldunk, és egy 30 x 2,2 cm méretű, Mere Kieselgel 60 (70-230 mesh ASTM, Art. No. 7734) oszlopra viszünk fel metilén-kloridban. Az ágyat metilén- kloriddal mossuk (2 ágy-térfogat), és 2 ágytérfogat kloroform és etil-acetát 3 : 1 térfogatarányú elegyével aluálunk. Az eluátum bepárlásával olajat kapunk, amelyet metanolban oldunk, és preparatív gyors folyadékkromatográfiának vetünk alá (Spherisoro S5 ODS-2 (250 mmx20 mm, Phase Sep.Ltd.). 5 ml mintát 1 perc alatt viszünk fel az oszlopra, és az oszlopot acetonitril és víz 7 : 3 térfogatarányú elegyével eluálunk a következő körülmények között: Idő (perc) Átfolyás (ml/perc) 0,00 0,00 1 Injektálás 1,00 0,00 ] ideje 1.10 30,00 39.90 30,00 40.00 35,00 75.00 35,00 A hplc oszlopról eluálodott anyagot UV spektroszkópiával vizsgáljuk 238 nm-nél. A 33,4-dik percnél eluálodott egyesített frakciók bepárlásával 34 mg cím szerinti terméket kapunk szilárd anyag formájában. E.I. tömegspektroszkópia 610 értéknél mutatott molekulaiont, amelynek jellemző fragmensei a következők: 592, 574, 556, 422, 259, 241. 1. példa 23(E)-metoxi-imino-A-faktor (a) 523-diketo-A-faktor 1,2 ml koncentrált kénsav, 120 mg nátrium-dikromát és 2 ml víz jéghideg oldatához erős keverés közben, 15 perc alatt hozzáadjuk 200 mg 5-keto-A- faktor és 15 mg tetrabutil-ammónium-hidrogén- szulfát 4 ml etil-acetáttal készült jéghideg elegyét. Egy óra múlva az elegyet etil-acetáttal hígítjuk, a szerves fázist telített vizes nátrium-hidrogén-karbonáttal mossuk. A megszárított szerves fázist bepároljuk és a kapott gyantaszerű terméket 100 ml, 0,037-0,062 mm Merck Kieselgel 60 töltetet tartalmazó oszlopon kromatografáljuk. Az eluálást 10 % etil- acetát-tartalmú diklór-metánal végezzük, így 86 mg cím szerinti terméket kapunk halványsárga hab formájában. NMR-spektrum: 5(CDCl3): 6,57 (m, 1H); 2,50 (s, 2H), 1,89 (m, 3H). (b) 5-keto-23(E)-metoxi-imino-A-faktor 475 mg 5,23-diketo-A-faktort, 69 mg metoxilaminhidrokloridot és 135 mg vízmentes nátrium-acetátot feloldunk metanolban. Az elegyet másfél óra hosszat szobahőmérsékleten tartjuk, majd 16 óra hosszat -18 °C-on, ezután etil-acetáttal hígítjuk, és 1 n sósavval, vízzel és sósvízzel mossuk. A megszárított szerves fázist bepároljuk, a kapott sárga habot 0,037-0,062 mm Merck Kiesel gél 60 töltetet tartalmazó oszlopon (120 ml) kromatografáljuk. Az eluálást hexán és etil-acetát 4 : 1 térfogatarányú elegyével végezzük, így 255 mg cím szerinti terméket kapunk sárga hab formájában. [a]D21 + 80“ (c = 1,20, CHCI3) ^max (EtOH) 24 1 nm (e 27,500), Vmax (CHBn), 3530, 3460 (OH) 1708 (C=0), 1676 (C=C-C=0), 986 (C-O), 8(CDCl3: 6,58 (s; 1H) 3,84 (s; 4H), 3,80 (s; 1H), 3,58 (m;lH), 3,30 (dl4; 1H), 1,00 (d6; 3H), 0,96 (d6; 3H), 0,92 (d6; 3H), (c) 23(E)-metoxi-imino-Afaktor (i) 6,5 mg nátrium-bór-hidridet hozzáadunk 83 mg 5-keto-23(E)- metoxi-imino-A-faktor 20 ml izopropanollal készült jéghideg oldatához. A sárga elegyet 35 percig jeges fürdőn keverjük, etil- acetáttal hígítjuk, és 1 n sósavval, vízzel, majd sósvízzel mossuk. A megszárított szerves fázist bepároljuk, és a kapott sárga gyantaszerű terméket 60 ml, 0,037-0,062 mm Merck Kieselgel 60 töltetet tartalmazó oszlopon kromatografáljuk. Az eluálást hexán és etil-acetát 2:1 térfogatarányú elegyével végezzük, így 58 mg cím szerinti terméket kapunk sárga hab formájában. Hexánból átkristályosítva olvadáspontja 203 ‘C. [a]D21 + 133“ (c = 1,12, CHQ3), A.max (EtOH) 244 nm (e 26,200), Ő(CDCl3): 4,29 (t7; 1H), 3,84 (s, 3H), 3,29 (dl5; 1H). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
