199560. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alfa-hidroxikarbonsavaknak a megfelelő l-alfa-aminokarbonsavakká történő folytonosüzemű, enzimatikus átalakítására
7 nu i»»üou D 8 tivitás (2 mmól/I 2-keto-4-metilmerkaptovajsavval, 1 mmôl/1 NADH-al, 800 mmôl/1 ammóniumformiáttal, 25°C-on, pH=8-on mérve) adódott. À reaktort 3,7 órás tartózkodási idővel 5 25°C-on és 8-as pH-n az említett körülmények között 4,5 napon át folytonosan üzemeltettük. Ezalatt az üzemidő alatt a membránon át a maximális nyomáskülönbség kb. 3 bar volt. A kísérlet időtartama alatt 38,4%-os ki- fO termelést értünk el, ami 2,6 nap leforgása alatt 36,4%-ra mérséklődött (a kitermelést a szubsztrátumban lévő L-enantiomerre számítjuk). A maximális tér-idő kitermelés 0,5 mól/(lXd), ill. 74,3 g/(lXd) volt. 4,34 na- 15 pon át tartó üzemidő alatt 3 g, ill. 20 mmól L-metionint ( [a] 25 =+23,4°) nyertünk. Az enzimátikusan aktív koenzim-koncentráció 4,34 nap alatt 1,42 mmól/l-ről 1,25 mmól/l-re csökkent. 20 Egy mól (felhasznált) koenzimre számítva 11.800 mól termék köpződött. Ez 378 mg natív NAD+ szükségletnek felel meg 1 kg termékre. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás a-hidroxikarbonsavaknak a megfelelő L-a-aminokarbonsavakká történő foly- 30 tonosüzemű átalakítására, vízoldható nagymolekulás anyaghoz végzett kapcsolással megnövelt molekulatömegű nikotinamid-adenin-dinukleotid (NAD+/NADH), a használt a-hidroxikarbonsavra specifikus dehidroge- 35 náz, az előállítandó L-a-aminokarbonsavra specifikus dehidrogenáz és ammóniumionok jelenlétében, enzimreaktorban, azzal jellemezve, hogy 2.000—50.000 névleges kizárási határú ultraszűrő membránnal ellátott membránreaktorba, amely 500—50.000 átlagos molekulatömegű polietilénglikolhoz kötött alakban jelenlévő, 0,1 —10 mmól/1 koncentrációjú NAD+/NADH oldatot, a használt a-hidroxikarbonsavra specifikus dehidrogenázt és az előállítandó L-a-aminokarbonsavra specifikus dehidrogenázt tartalmaz, folyamatosan betápláljuk az átalakítandó a-hidroxikárbonsav olyan koncentrációjú vizes oldatát, amely a maximálisan oldható mennyiség 25—100 t%át tartalmazza, továbbá az a-hidroxikarbonsavnak megfelelő a-ketokarbonsavnak a használt aminokarbonsav-dehidrogenázra számított, 1 —10 km koncentrációjú oldatát, valamint az átalakítandó a-hidroxikarbonsav — mennyiséggel legalább ekvimoláris mennyiségű ammóniumiont, a membránon át 0,1 — 15 bar nyomáskülönbséget tartunk fenn, és a membrán mögött képződött, L-a-aminokarbonsavat tartalmazó szűrlet-áramot folytonosan elvezetjük, mimellett a membránreaktor hőmérsékletét 25—50°C-ra szabályozzuk és a reakcióelegy pH-értéke a reakció alatt 8 és 9,5 közötti. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az átalakítandó a-hidroxikarbonsavat racemát alakjában tápláljuk be és az L-enantiomerre specifikus, valamint a D-enantiomerre specifikus dehidrogenáz elegyét tápláljuk be. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az átalakítandó a-hidroxikarbonsavat racemát alakjában tápláljuk be, és csak az L-enantiomerre vagy a D-enantiomerre specifikus dehidrogenázt tápláljuk be, de a reakciót az a-hidroxikarbonsavra specifikus racemáz egyidejű jelenlétében hajtjuk végre. Rajz nélkül Kiadja: Országos Találmányi Hivatal, Budapest A kiadásért felel: Himer Zoltán osztályvezető Ns 1285. Nyomdaipari vállalat, Ungvár
