199559. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A 10255 antibiotikum komplex és faktorai, valamint ezeket tartalmazó készítmények előállítására
HU 199559 B jű laboratóriumi összehasonlításokon alapszik-A Streptomyces fajok jellemzésére az International Streptomyces Project (ISP) által ajánlott módszereket [E.B. Shirling és D. Gottlieb, „Methods for characterization of Streptomyces species", Int. J.Syst. Bacteriol., 16 (3): 313—340 (966)] bizonyos további vizsgálatokkal [D.J. Balzevic és G.M. Ederer, „Principles of biochemical test in diagnostic microbiology", John Willy and Sons, Inc., New York, 1975] egészítettük ki. A szénhasznosítást ISP No.9 alaptalajon határoztuk meg, melyhez 1%-os végkoncentrációban adtunk szűréssel sterilizált szénforrást. A lemezeket 30°C hőmérsékleten inkubáltuk, és 14 nap elteltével értékeltük. A melanoid-pigment termelését (kromogenitás) ISP No.l (tripton/élesztőkivonat), ISP No.6 (pepton/élesztőkiv‘onat/vas agar), ISP No.7 (tirozinos agar) és módosított ISP No.7 (tirozin nélkül) táptalajon határoztuk meg. A keményítőhidrolízist jódos keményítő jelenlétében határoztuk meg ISP No.4 (szervetlen sók/keményítő agar) táptalajon (1. Blazevic és Ederer). A morfológiai vizsgálatokhoz fénymikroszkópot használtunk. A spórafelszín rajzolatának meghatározásáhozz letapogató elektronmikroszkópot (SEM) alkalmaztunk. A nátrium-klorid-tűrés megállapításához kívánt koncentrációban nátrium-kloridot adtunk az ISP No.2 agárhoz. A színek megnevezése az ICSS-NBS Centroid Color Charts, stadard sample No.2106 (National Bureau of Standards, 1958, U.S. Department of Commerce, Washington, D.C.) és a Color Harmony Manual (4. kiadás, Color Standards Department, Container Corporation of America, Chicago, Illinois, 1958) alapján történt. A sejtfal cukorjait M.P. Lechevalier [„Identification of aerobic Actenomycetes of 11 clinical importance", J. Lab. Clin. Med., 71: 934—944 (1968)] eljárásával határoztuk meg. A diaminopimelinsav (DAP) izomereket B. Becker, M.P. Lechevalier, R.E. Gordon és 5 H.A. Lechevalier [„Rapid differentiation between Nocardia and Streptomyces by paper chromotography of Whole-cell hydrolysates", Appl. Microbiol., 11: 421—423 (1964)] kromatográfiás módszereivel állapítottuk meg. 10 Az A10255.1 törzs tenyészetének jellemzői: Korlátozott vegetatív- és nagyon gyengén fejlett légmicéliumok. A légmicélium spóra- 15 tömegének a színe a fehér (W) — szürke (GY) sorozatba tartozik. A Tresner és Backus rendszerben [Color Harmony Manual, 1. fent és E. J. Backus és H.D. Tresner, „System of color wheels for Streptomyces taxonomy", Appl. 20 Microbiol., 11; 335—338 (1956)1 ehhez a színhez a legközelebb álló szín a fenér sorozatban a „b oyster white” (osztrigafehér), a szürke színsorozatában a „d^ light gray" (halványszürke). A tenyészetnek fenti leírása leg- 25 inkább a glicerines/aszparaginos agaron (ISP No.5) figyelhető meg. A légmicélium a legtöbb táptalajon oly gyengén fejlődik ki, hogy a szín meghatározása nagyon nehéz. 30 A tenyészet fonák oldalának nincsenek megkülönböztető színanyagai. A fonák oldal színe narancssárgától sárgás-barnáig változik, és a színt a pH nem befolyásolja. Az egyetlen oldható halványbarna színanyag a tirozi- 35 nos agaron (ISP No.7) és a paradicsompasztás, zablisztes agaron (TPO) termelődik, míg glicerines, glicines agaron a termelt színanyag halvány narancsszínű. A variabilitási vizsgálatok alapján megállapítható volt, hogy a 40 tenyészet stabil és homogén. Az A10255.1 törzs és a Streptomyces gardneri ATCC 23911 törzs tenyészetének jellemző tulajdonságait az I. táblázatban foglaljuk össze. 12 I. TÁBLÁZAT agar A10255.1 S.gardneri ISP N közepes közepes No.2 pl 72.d.0Y. 72.d. OY. Lm2 gyenge: b White (csak a széleken) gyenge : d light Gray (csak a széleken) Op nincs nincs ISP N nyomokban-közepos ny om okban No. 3 F 70.1.0YLw nyomokban, b White (csak a széleken) nincs °p nincs nincs 7
