199511. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sárgaszínű, stabil humán albumin oldat előállítására emberi vérplazmából
5,2 pH-jú 1,5 mS vezetőképességű nátriumacetát puffer, 2) 0,025 mólos 4,5 pH-jú 0,2 mS vezetőképességű nátriumacetát puffer, 3) 0,15 mólos 4,8 pH-jú 8,8 mS vezetőképességű nitrogénacetát puffer, az 1. pufferrel eluáljuk a globulin frakciót, melyet globulin feldolgozás céljaira félreteszünk, a 2. pufferrel történő eluáláskor albumin frakciót nyerünk, a 3. pufferrel a szennyező fehérjéket eluáljuk; az albumin frakciót ezt követően 0,025 mólos 4,5 pH-jü 1,8 mS vezetőképességű nátriumacetát pufferral ekvilibrált CM-Sepharose FF jelő [Pharmacia katalógusszám (1988): 170719—01] kationcserélő gyantaoszlopra visszük fel, három lépésben eluálunk a következő pufferekkel: 1) 0,025 mólos 4,5 pH-jú 1,8 mS vezetőképességű nátriumacetát puffer, 2) 0,11 mólos 5,5 pH-jú 6.0 mS vezetőképességű nátriumacetát puffer, 3) 0,4 mólos 8,2 pH-jú 23 mS vezetőképességű nátriumacetát puffer, az 1. pufferral kapott szennyező fehérjéket tartalmazó eluátumot elvetjük, a 2. pufferral kapott eluátum tartalmazza az albumin frakciót, a 3. pufferral eluált szennyező fehérjéket tartalmazó eluátumot elvetjük; ezt követően a 2. pufferral eluált albumin frakció pH-ját nátrium hidroxid vizes oldatával 6,5 pH értékre állítjuk, majd előzetesen 0,05 mólos nátriumklorid oldattal ekvilibrált Sephaeryl S-200 HR jelű [Pharmacia katalógusszám (1988) 17—0584—01] gélszűrőre visszük, majd 0,3 mólos 7,0 pH-jú 4,5 mS vezetőképességű acetátpufferrel eluáljuk az albumin frakciót, melyet 20,0% összfehérje tartalom eléréséig ultraszűrővel besűrítjük, majd a nátriumion tartalmat szilárd nátrium-klorid adagolásával 130 millimól/liter értékre, a pH-t 7.0 pH értékre állítjuk be 1 mólos sósav-oldat, vagy 1 mólos nátrium-hidroxid-oldat adagolásával és stabilizáló szerként nátriumkaprilát-oldatot adagolunk 0,04 mól/liter nátriumkaprilát végkoncentráció eléréséig, végül az oldatot sterilre szűrjük és palackozzuk, a palackozott albumin oldatot 10 órán át 60°C- on pasztörizáljuk. Az albumin oldat összfehérje tartalma 20,0%, az összfehérje 98%-a albumin. Az oldat színe zöld, kép napot állás után csapadék válik ki. 2. példa 47 liter véralvadási faktoroktól mentesített 5,8% összfehérje tartalmú emberi vérplazmát az 1. példa szerinti Sephadex G-25 gyantán sómentesítünk, a sótalanítás után nyert 82 liter 7,3 pH-jú 0,6 milli Siemens (továbbiakban mS) elektromos vezetésű oldat pH-ját 2000 milliliter 1 mólos ecetsavval 4,2 pH értékre állítjuk, majd 2900 milliliter 1 mólos nátriumkaprilátot adagolunk 5,2 pH érték eléréséig miközben az elektromos vezetés 2,28 mS értékre emelkedik, ezt követően 60 liter desztillált víz adagolásával az oldat elektromos vezetését 1,6 mS értékre állítjuk. A reakcióelegyet egy éjszakán át szobahőmérsékleten tároljuk, majd 14.000/perc fordulatszámmal centrifugáljuk, 2500 gramm csapa-, dék keletkezik, melyet elvetünk, a felülúszót anioncserélő gyantaoszlopra vive a továbbiakban az 1. példában leírtak szerint járunk el. 5600 milliliter 20% összfehérje tartalmú oldatot kapunk, az összfehérje 99%-a albumin. Az oldat halványsárga színű, csapadékkiválást több napos állás után sem tapasztalunk. 3. példa 60 liter 5,5% összfehérje tartalmú alvadási faktoroktól mentes emberi vérplazmát Sephadex G-25 gyantán sómentesítünk az 1. példa szerint, a sótalanítás után nyert 100 liter 7,14 pH-jú 0,66 milli Siemens (továbbiakban mS) elektromos vezetésű oldat pH-ját 900 ml 2 mólos ecetsavval 4,4 pH értékre, majd keverés közben 310 ml kaprilsav adagolásával 4,3 pH értékre állítjuk, további egy órán át tartó keverés után a reakcióelegyet centrifugáljuk 14.000/perc fordulatszámú centrifugán, 1990 gramm csapadékot nyerünk, melyet elvetünk, a felülúszó pH-ját 1900 milliliter 1 mólos nátrium-hidroxid oldattal 5,2 pH értékre, az oldat elektromos vezetését desztillált vizes hígítással 1,5 mS értékre állítjuk. A reakcióelegyet egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd 14.000/ /perc fordulatszámmal centrifugáljuk, 380 gramm csapadékot nyerünk, melyet elvetetünk, a felülúszót anioncserélő gyanta-oszlopra vive a továbbiakban az 1. példa szerint járunk el. Végtermékként 6000 milliliter 20% összfehérje tartalmú oldatot nyerünk. Az összfehérje 99%-a albumin, az oldat sárga színű, csapadékkiválást több napos állás után sem észlelünk. 1 A 6 SZABADALMI IGÉNYPONT Eljárás sárga színű, stabil humán albumin oldat előállítására véralvadási faktoroktól mentes emberi vérplazmából a plazma ismert módszerrel gyantaoszlopon történő sómerltesítésével, majd anion-, és kationcserélő gyantával és gélszűréssel történő frakcionálásával, ultra szűréssel való koncentrálásával, majd a nyert 20%-os albumin oldat pH-jának és nátriumion koncentrációjának a fiziológiás értékre történő beállításával, az oldat ezt követő alkálifém kaprilát stabilizátor jelenlétében végzett sterilizálásával, azzal jellemezve, hogy a) a sótalanított plazma pH értékét szerves savval, előnyösen 1 mólos ecetsavval 3,9— 4.5 pH értékre, előnyösen 4,2 pH értékre állítjuk, majd 4,8—5,4 pH érték, előnyösen 5,2 pH érték eléréséig alkálifém-kaprilátot, előnyösén nátrium-kaprilátot adagolunk és az oldat elektromos vezetését desztillált víz adagolásával 1,4—1,8 milli Siemens, előnyösen 1.6 milli Siemens értékre állítjuk be, az oldatot egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd centrifugáljuk, vagy 19951 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
