199461. lajstromszámú szabadalom • Eljárás oktahidro-indolizin és -pirido(1,2-a)pirimidin-propánsav-származékok előállítására
nu jyy^oi t> cil-szilánozott Whatman LP-1 szilikagélt tartalmazó 8 cmXl m-es oszlopon. Az oszlopot először 2 liter hangyasav/víz (0,3:99,7 térf.%) majd 5 liter acetonitril/hangyasav/víz (0,3: :99,7 térf.%), majd 5 liter acetonitril/hangyasav/víz (1,0:0,3:98,7 térf.%), és végül 20 liter acetonitril/hangyasav/víz (2,5:0,3: :97,2 térf% ) eleggyel fejlesztjük ki. 50 ml-es frakciókat szedüntc. Az A-faktort tartalmazó 32—44. frakciót egyesítjük és' 200 ml térfogatra bepároljuk. A HPLC-vel kapott fenti A-fatorkoncentrátumot 100—200 mesh szemcseméretű Bio- Rex 5 (Cl-) gyantát (BioRad Laboratories, Richmond, CA) tartalmazó 2,5 X 30 cm (180 ml) oszlopra visszük fel. A gyantát ionmentes vízzel mossuk, és a mosófolyadékot és az effluenst elöntjük. Az oszlopot 400 ml 0,20M NaCl-oldattál, majd 2200 ml 0,35M NaCl-oldattal fejlesztjük ki. 20 ml térfogatú frakciókat gyűjtünk és a tiszta A-faktort tartalmazó 106—140. frakciót egyesítjük. Az egyesített frakciók pH-ját In sósavoldattal 2,3- ra állítjuk be, majd 0,01 n sósavoldattal elkészített Diaion HP-20 gyantát tartalmazó, 2,8X19 crmes (120 ml) oszlopra visszük fel. Az oszlopot először híg sósavoldattal pH 2,3- ig megsavanyított 100 ml ionmentes vízzel, majd 220 ml ionmentes vízzel (pH 5,9) mossuk, és utána 340 ml acetonitril/víz (15: :85 térf.%) eleggyel eluáljuk. Frakcionálva mintegy 180 ml össztérfogatot gyűjtünk össze. A 0—180 ml frakciót egyesítve, bepárolva és liofilizálva 1,31 g tiszta A-faktort kapunk. A Diaion HP-20 oszlopról a fentiek szerint eluált, B'-faktort tartalmazó frakciókat egyesítjük és koncentráljuk, majd 9,3X80 cm (5 liter) Dowex 50WX2 (H+) gyantaoszlopra visszük fel. Az oszlopot 32 liter ionmentes vízzel eluáljuk. 1 literes frakciókat gyűjtve a B-faktort ez eluátum 10—14. literében kapjuk meg. Az aktív frakciókat egyesítjük és körülbelül 250 ml térfogatra bepároljuk. Az A58365 B-faktort tartalmazó koncentrátumot az A-faktor tisztításánál leírt fordított fázisú HPLC-vel tisztítjuk. Az oszlopot először 2 liter hangyasav/víz (0,3:99,7 térf.% ) majd acetonitril/hangyasav/víz (6,0:0,3: :93,7 térf.%) és végül acetonitril/hangyasav/ /víz (15,0:0,3:84,7 térf.%) eleggyel fejlesztjük ki. Körülbelül 500 ml-es frakciókat gyűjtünk. A B-faktort tartalmazó 24. frakciót 100 ml-re bepároljuk. A B-faktor koncentrátumát tovább tisztítjuk anioncserélő pyantán, a következőképpen: BioRex 5 (Cl-) anioncserélő gyantával töltött 2,0 cm belső átmérőjű és 25 cm hosszú oszlopra felvisszük a koncentrátumot és az oszlopot először 200 "ml 0,2M NaCl-oldattal, majd 1600 ml 0.35M NaCl-oldattal eluáljuk. Számos 10 ml térfogatú frakciót gyűjtünk és a 193—210. frakciót egyesítjük. Az egyesített frakciók pH-ját In sósavoldattal 2,3-ra állítjuk be, majd 20 cm hosszú és 8 mm belső átmérőjű (10 ml), 0,01n sósavoldattal előállított Diaion HP-20 oszlopra visszük fel. 19 Az oszlopot először 300 ml ionmentes vízzel (pH 2,3-ra beállítva), majd 14 ml ionmentes vízzel (pH 5,9) mossuk. Az effluenst és a mosófolyadékot elöntjük, és a B-faktort 44 ml acetonitril/víz (15:85 térf.%) eleggyel eluáljuk. Számos 2 ml-es frakciót gyűjtünk. A 8— 11. frakciót egyesítjük és 1 ml térfogatra bepároljuk. A koncentrátumot liofilizálva 2,9 mg tiszta B-faktort kapunk. 7. példa O-Acetif-A-faktor A-faktort (100 mg) szobahőmérsékleten 12,5 ml piridinnel és 12,5 ml ecetsavanh'idriddel elkeverve az O-acetilszármazék, 3-karboxi-8-acetoxi- tetrahidroindolizin-6-propánsav képződik. A terméket fordított fázisú HPLC- vel tisztítjuk 2,54 cm belső átmérőjű és 30,38 cm hosszú rozsdamentes acél Zorbax ODS oszlopot (12 (x részecskeméret) használva. A oldószer: 0,2% hangyasav/víz; B oldószer: 0,2 hangyasav/8% acetonitril/víz. Számos 20 ml-es frakciót gyűjtünk (2 min per frakció) és az elválasztást 310 és 254 nm hullámhosszon detektáljuk. Az 1—35. frakciót az A oldószerrel és a 36—92. frakciót a B oldószerrel gyűjtjük össze. Az O-acetil-A-faktort az 56—83. frakcióban kapjuk meg. FD/MS (M+H)+=310. 'H NMR (270 MHz, D20): 6 (ppm) 2,35 (3H, s), kb. 240 (1H, m), 2,62 (1H, m), 2,69 (2H, t), 2,80 (2H, m), 3,11 (2H, t), 5,15 (1H, dd, J=10,3 Hz), 7,44 (1H, s). 8. példa Dezoxi-A-faktor és tetrahidrodezoxi-A-faktor előállítása O-acetil-A-faktorok keresztül 4,7 mg O-acetil-A-faktor 4,5 ml In sósavoldattal készült oldatához 10 mg platina-oxid katalizátort (előredukált) adunk. A keveréket hidrogénatmoszférában körülbelül 20 percig hidrogénezzük. A katalizátor leszűrése után analitikai fordított fázisú HPLC elemzést végzünk, mely szerint a redukciós termékkeverék 68% dezoxi-A-faktort, 29% tetrahidrodezoxi-A-faktort és 3% A-faktort tartalmaz. 9. példa Dezoxi-B-faktor előállítása O-acetil-B-faktoron keresztül A fenti 7. és 8. példában leírt körülményeket alkalmazva B-faktort O-acetil-B-faktorrá acilezzük és az utábbit Pt20 (előredukált) felett In sósavoldatban hidrogénezve dezoxi-B-faktort kapunk. 20 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás (1) általános képletű vegyületek — ahol Y a általános képletű csoportot vagy -CH2-CH(R2)- általános képletű csoportot jelent, melyben R2 hidrogénatomot vagy hidroxilcsoportot; 11 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
