199429. lajstromszámú szabadalom • Új imidazolszármazékokat tartalmazó reagens-készítmény hidrogén-peroxid és peroxidként ható anyagok kimutatására,valamint eljárás az imidazolszármazékok előállítására
HU 199429 B A 9 jelzésű reagenspapir készítése céljából a fent említett szívóképes hordozót 5000 egység szarkozinoxidáz, 30,000 egység kreatinin-amidohidroláz és 40,000 kreatinin-amidino-hidroláz, 0,5 g Triton X 100 100 ml 0,1 mólos 8,0 pH-jú foSzfátpufferral készített oldatával impregnáljuk, és megszárítjuk. Mindkét papírt a 2. ábrának megfelelően tesztrendszerbe bedolgozzuk. Kreatinin szérumban való kimutatása céljából 30 pl szérumot pipettázunk az adagolózónára. Az enzim- és indikátorpapírnak az átvezető zónára való rányomásával indítjuk a reakciót. A megfelelő elszíneződést egy perc elteltével remisszióá fotometriásan mérjük. A kiértékelés kalibrációs görbén át történik. A következő táblázatban megadjuk a szérumban lévő kreajininre kapott kalibrációs görbe adatait: Kreatinkoncentráció % remisszió 17 0,1 mg/100 ml 68,0 0,5 mg/100 ml 57,2 1,5 mg/100 ml 45,1 5,0 mg/100 ml 32,7 10,0 mg/100 ml 26,4. 13. példa: Tesztrendszer húgysav vérben való kimutatására. Az alább felsorolt alkotórészekből rétegmasszát készítünk, és egy átlátszó fóliára nedvesen 200 p vastagságú film réteget kenünk fel, és megszárítjuk. A rétegmassza összetétele: 18 g vinil-acetátból és vinil-propionátból készült keverékpolimer műanyag diszperziója 1,38 g alginát, 69 g 7,5 pH-jú 0,45 mólos trisz-citrát puffer, 0,47 g 1. példa szerinti indikátor — 4-(5)-Í4-(dimetil-aminó)-fenil] -2-(3,5-dimetoxi-4-hidroxi-fenil)-5- - (4) -metil- ( 1H) -imidazol-hidroklorid —, 0,025 g 1 - (3-klór-fenil) -szemikarbazid, 0,025 g magnézium-dikálium-(etilén-diamin-tetraacetát)-dihidrát, 0,5 g Triton X 100, 0,6 g hexanol, 200,000 egység peroxidáz, 2000 egység urikáz. Az így elkészített rétegre egy második réteget kenünk fel 200 pm rétegvastagságban az alább — megadott összetételű optikailag fehér háttérként, és megszárítjuk. A rétegmassza összetétele: 52 ml 0,1 mólos 7,0 pH- jú trisz-citrátpuffer, 5,5 g titán-dioxid, 2,7 g diatomaföld, 0,4 g alginát, 1,4 g vinil-acetát és vinil-propionát keverékpolimerizátumának müanyagdiszperziója, 0,2 g Triton X 100. Az így elkészített tesztfilmet a 3. ábra szerinti tesztekké dolgozzuk fel. Húgysav vérbői való kimutatására 30 pl vért viszünk fel az adagolózónára, a reagensfület egy perc múlva rányomjuk, és a keletkező elszíneződést további két perc múlva mérjük remissziós fotométerrel, és egy előbb kimért kalibrációs görbéből számítjuk ki a húgysavtartalmat. A következő táblázatban megadjuk a kalibrációs görbére kapott értékeket: Húgysavkoncentráció % remisszió. Í6 53/) 7,9 40,3 9,8 35,0 13,5 28,3 20,2 19,8. 14. példa: Tesztrendszer GOT kimutatására vérben. (GOT=glutamát-oxálacetát-transzamináz.) Egy-egy szívóképes hordozót (a Schöller és Hösch cég sablonpapírja; felületsúly: 12 g/ /m2; szívóképesség: 50 ml/m2) impregnálunk az alább megadott összetételű 1 és 2 oldatokkal, és utána megszárítjuk. Az 1. oldat: egy liter 0,2 mólos kálium-hidroxidból és 2- - (N-morfolino) -etánszulfonsavból készített 6,7 pH-jú pufferban 0,03 mól a-keto-glutarátot, 0,8 mól alaninszulfinsavat, 0,01 mól magnézium-kloridot, 0,0001 mól aszkorbinsayat, 0,009 mól 1. példa szerinti anyagot és 5 g oktil-piranozidot oldunk. Ezzel kapjuk a 8 jelzésű reagenspapírt. 2. oldat: egy liter előbb említett pufferban oldunk 0,003 mól tiamin-pirofoszfátot, 500,000 egység piruvátoxidázt, 500,000 egység peroxidázt, 100,000 egység aszkarbátoxidázt. Ezzel kapjuk a 9 jelzésű reagenspapírt. Ezeket a reagenspapírokat a 2. ábra szerinti tesztrendszerré dolgozzuk fel. Az enzimaktivitás meghatározása céljából 30 pl vért pipettázunk az adagolózónára, egy perc múlva rányomjuk a fedőfóliát és a reagenspapírokat, és a színképződést az időben remissziós fotométerrel követjük. A kiértékelés kétpontos mérésen át történik egy vonatkozási görbéből. A vonatkozási görbét úgy vesszük fel, hogy 10—1000 egység/ /liter enzimaktivitású hígítási sorozatokat készítünk, és remissziós fotométerben a remisszió értékeket rögzített idős mérésekkel feldolgozzuk. 15. példa: Eljárás alacsony glükózkoncentrációk kimutatására vérben hipoglikémia diagnózisa céljából. Nyersfilmmasszát készítünk a következőképpen: 10 g 0,5 mólos 5,0 pH-jú foszfátpufferral készített 1,7 tömeg%-os alginátduzzasztmányt, 15 g vinil-acetátból és vinil-propionátból készült kopolimer vizes műanyagdiszperziót, 5 g 15 tömeg%-os vizes 4-dodecil-benzol-szulfonát oldatot, 25,000 egység glükózoxidázt., 200,000 egység peroxidázt, 270 mg 1. példa szerinti indikátoranyagot, 10 g diatomaföldet, 0,4 ml hexanolt homogén péppé keverünk, és nedvesen 150 pm filmvastagságban felkenjük egy multifii szövetre (Sch-18 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
