199168. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új makrolid-antibiotikum és az új antibiotikumot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
199168 11 kukoricalekvár 5,0 g CaC03 2,0 g NaCl 5,0 g desztillált víz 1 liter pH 6,5 Az említett Erlenmeyer-lombikokba, illetve palackokba töltött közeget 121°C-on 30 percen át steriiezzük, majd lehűlés után a spóraszus-zpenzióval beoltjuk. A tenyészeteket 72 órán át 27°C-on (±1°C) tartjuk, 38 mm kilengésű, 240 perc“1 fordulatszámú forgó rázógépen. A kapott termékkel 2 db 15 literes oltótenyészet-közeget tartalmazó üvegfermentort oltunk be, ez lesz az oltótenyészet második lépcsője. A fermentálás hőmérséklete 27°C (±1°C), a keverő fordulatszáma 180—200 perc“1, és a levegőztetés 6—7 liter/perc. 24 óra fermentálás után dús növekedésű oltótenyészetet kapunk, amellyel a termelő tenyészetet oltjuk be. A termelő közeg összetétele: glükóz 15,0 g oldható keményítő 20,0 g szója liszt 3,0 g pepton 3,0 g CaC03 2,0 g NaCl 2,0 g kukoricalekvár 2,0 g (NH4)2S04 0,5 g desztillált víz 1 liter pH 6,5 A fermentorokba 0,025% ,desmophenR habzásgátlót is adunk. 280 liter fenti összetételű közeget 390 liter térfogatú fermentorba adunk, és a közeget közvetett és közvetlen gőzfűtéssel 121°C- on 28 percen át steriiezzük. A fermentort lehűtjük, és 7 tf%-nyi második oltótenyészet'tel beoltjuk. A fermentálást 27°C-on (±1°C) 100—200 fordulatszámú keverővei keverve 40—45 órán át végezzük. A levegőztetés sebessége 170 liter/perc. A fermentációs idő leteltével a közeg pH-ja 6,4 és 6,8 közötti, az agartálka módszerével (6 mm átmérő) mérve a tenyészlé Staphylococcus aureus 209P elleni gátlási zónája 16 mm átmérőjű. Az elválasztott sejtvolumen 28—30 tf%. Az antibiotikum-komplexet tartalmazó tenyészlét a micélium elválasztása céljából centrifugáljuk, a szűrletet és a micéliumot a 6. példában leírtak szerint dolgozzuk fel. 3. példa Streptomyces' sp. Y-84,30967 tenyésztése swalpamicin fermentációs előállítása céljából A 2. példában leírtak szerint járunk el, az alábbi eltérésekkel. Az agarközeg összetétele: oldható keményítő 10,0 g K2HP04 1,0 g MgS04.7H20 1,0 g NaCl 1,0 g (NH4)2S04 2,0 g CaC03 2,0 g FeS04.7H20 0,1 mg MnCl2.4H20 0,1 mg ZnS04.7H20 0,1 mg agar 15,0 g desztillált víz 1 liter pH 7,2 A termelő közeg összetétele glükóz 20,0 g szójaliszt 10,0 g CaC03 0,2 g CoCI3.6H20 0,1 g desztillált víz 1 liter pH 7,0 12 A fenti közeg 100 literjét 150 liter térfogatú fermentorba adjuk és közvetett, valamint közvetlen gőzfűtéssel 121°C-on 29 percen át steriiezzük. A fermentort lehűtjük és a második oltótenyészet 9 tf%-ával beoltjuk. A fermentálást 27°C-on (±1°C), 80 — 90 perc“1 fordulatszám mellett, 60—70 1/perc levegőztetéssel végezzük. 40—43 óra elteltével a közeg pH-ja 6,45, és az agartálka módszerével vizsgált gátlási zóna Staphylococcus aureus 209p esetén 15 mm. Az elválasztott sejtvolumen 18—24 tf%-ot tesz ki. A tenyészlét a 7. példa szerint dolgozzuk fel. 4. példa Streptomyces sp. Y-84,30967 tenyésztése swalpamicin előállítása céljából A 2. példa szerint, járunk el, az alábbi eltérésekkel: Az agarközeg összetétele zabliszt 20,0 g agar 15,0 g FeS04.7H20 0,1 g ZnS0.7H20 0,1 mg MnCl2.4H20 0,1 mg desztillált víz 1 liter pH 7,2 Az oltótenyészet-közeg összetétele keményítő 30,0 g nádcukor 10,0 g glükóz 10,0 g szójapepton 15,0 g kukoricalekvár 10,0 g K2HP04 3,0 g NaCl 1,0 g CaC03 3,0 g CuS04.5H20 7,0 mg FeS04.7H20 1,0 mg MnCl2.4H20 8,0 mg ZnS04.7H20 2,0 mg desztillált víz 1 liter pH 7,2 A termelő közeg összetétele dextrin 20,0 g szójaliszt 10,0 g élesztőkivonat 2,0 g FeS04.7H20 0,1 g desztillált víz 1 liter pH 6,5 A fermentálást 49 órán át végezzük, utána a tenyészlé pH-ja 6,75, Staphylococcus aureus 209P ellen kialakított gátlási zónája 15 mm 7 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
