199166. lajstromszámú szabadalom • Proteolitikus enzimet tartalmazó stabilizált folyékony mosó-tisztító kompozíció

199166

hogy az enzim aktivitását a kiváló mosó-tisztító hatású anionos detergensek nagy mértékben csökkentik. Törekvésünk tehát az voit, hogy a kísérletekhez nagy mosóhatású enzimes készítményt állítsunk elő. Ezért Slapnak dialkilszulfoszukcinát (Na-só) nevdesítőszert, dodecil-benzolszulfonát (Na-só) és lauril-alkoholszulfát (Na-só) detergenseket — mindhárom anionaktív — és nátrium-tripolifoszfát szekvesztáló anyagot tartalmazó rendszert alkalmaztunk, és ehhez adtunk enzimet, meg különböző stabilizáló szereket és vizsgáltuk az enzimaktivitás változását a tárolás folyamán.

50 g szobahőmérsékletű vízben keverés mellett feloldottunk 2 g nátrium-tripolifoszfátot. Ehhez adtunk 3 g 40 tömeg%-os vizes nátrium-hidroxid oldatot, majd keverés mellett kis adagokban dodecil-benzol-szulfonsavat mindaddig, amíg az elegy pH-ja 7 nem lett (6 g dodecil-benzol-szulfonsavra volt szükség). Ezután 4 g lauril-alkoholszulfátot és 3 g 2,5 Anson/g proteolitikus aktivitású Alcalase enzimet (a Novo Industri A. S. dán cég gyártmánya) adagoltunk keverés mellett az elegyhez. (Egy Anson egység (Anson Unit, AU) proteináz 4,5 pH értéken, 35,5°C-on 10 perc alatt a denaturált hemo globint olyan kezdeti sebességgel bontja,

3

hogy az 1 perc alatt képzett 0,3 N triklór-ecetsavban oldódó lebontási termékek Folin reagenssel ugyanazt a színerősséget adják, mint 1 mmól tirozin.) Az így elkészült deter- 5 gens alaphoz adtuk a különböző stabilizátorokat, illetve a találmány szerinti kompozícióban stabilizátorként használt polietilénglikol-zsírsavésztereket. Végül az elegy tömegét vízzel 100 grammra kiegészítettük.

10

Az enzimaktivitást a Method for Enzyme Investigation vol. 2. (1956) 237—254 oldalain ismertetett módszerrel vizsgáltuk. E szerint foszfátpufferral pH 7-re beállított zsela- 15 tinoldatot készítettünk, ehhez adtuk az enzimet és aktivátort tartalmazó készítményt, majd 40°C-on mértük az oldat viszkozitását, illetve változását a reakcióidő függvényében. Ebből kiszámítottuk az enzimaktivitást 20 VRP/ml egységben megadva. (Egy VRP (Viscosity Reduction of Proteinase) egység proteináz 1 ml 10 tömeg%-os zselatinoldat viszkozitását 1 perc alatt a felére csökkenti.) A méréseket az elkészítés napján, majd 25 37°C-on tárolva egy hét után, négy hét után, három hónap után és hat hónap után végeztük.

A mérési eredményeket az 1. táblázat tartalmazza.

4

1. táblázat

összetevők

1

2

Kísérlet 3 4 5

sorszáma 6 7

8

9

Nátriumtripolifoszfát

2

2

2

2

2

2

2

2

2

Dioktilszulfoszukcinát

1

1

1

1

1

1

1

1

1

Laurilalkohol szulfát

4

4

4

4

4

4

4

4

4

Dodecilbenzol szülfonat

6

6

6

6

6

6

6

6

6

Glicerin-10-10

»-Propilénglikol-10

10

5--10-Etilénglikol-10--5

Poliglikol 200--5-Nátriumbiszulfit-1

1

5

5--3

Trietanolamin-2

2-Bórax

Polietilénglikol /M=810/

—-5

5-3

acetat-mirisztát Polietilénglikol /M=500/

—

—

4

““

5

f ormiát-palmitát Enzim 2,5 Anson/g proteolitikus aktivitásé Víz

8

3

3

3

100

3 3 granunra

3 ^ 3 3 kiegészítve

3

Enzimaktivitás VRP/ml - -ben az elkászítás napján

5

5

37°C-on tárolva-1

hét

4,0

4,6- 4

bet

2,4

3,5- 3

hó

0,3

1,8

időtartam után- 6

hó

9,5

5

5

5

5

5

5

5

4,7

4,7

4,8

4,7

4,8

4,9

4,8

3,9

3,8

4,3

4,2

4,4

4,6

4,5

2,6

2,-5

3,5

3,3

3,8

4,1

3,9

1,5

1 >3

2,9

2,5

3,4

3,8

3,5

3