199160. lajstromszámú szabadalom • Eljárás GnRh antagonista ciklusos dekapeptidek előállítására

199160

A találmány szerinti eljárást az alábbi példákon részletesen bemutatjuk:

1. példa

Az (I) általános képletű, az I. táblázatban felsorolt peptideket az alábbiakban leírt szilárd fázisú módszer szerint állítjuk elő.

Példaként ismertetjük az I. táblázat 1. peptidjének [(Ac-ß-D-2-Nal1, /4C1/D-Phe2, D-3-Pal3,6, Cys4,10, Arg5)-GnRH] pepiid szilárdfázisú szintézisét. A peptid az alábbi képlettel rendelkezik:

Ac-ß-D-2-Nal- (4Cl)D-Phe-D-3-Pal-Cvs-Arg-D-3-Pal-Leu-Arg-Pro-Cys-NH2. '

BHA gyantát alkalmazunk, és a gyantához háromszoros felesleg Boc-származékot és DCC aktiválószert alkalmazva, diklór-metánban, 2 órás reakcióidő alkalmazásával Boc-védett Gly-csoportot kapcsolunk. A glicincsoport a BHA gyantához amidkötéssel kapcsolódik. Minden egyes aminosav kapcsolása, mosása és védőcsoportjainak eltávolítása után automata berendezés alkalmazásával, 5 g gyantából kiindulva az alábbi eljárásnak megfelelően végezzük a kővetkező aminosav kapcsolását:

Lépés Reagensek és műveletek Keverési idő

7

(perc)

1.

CH2CI2 mosás-80 ml (kétszer)

3

2.

metanol (MeOH) mosás-30 ml (kétszer)

3

3.

CH2C12 mosás-80 ml (háromszor)

3

4. 50% TFA és 5% 1,2-etán-ditiol CH2Cl2-ben-70 ml

(kétszer) 10

5. izopropanol-f-1 % etán-di-5 tiol mosás 80 ml (kétszer) 3

6. TEA (trietil-amin) 12,5%

CH2Cl2-ben-70 ml (kétszer) 5

7. MeOH mosás-40 ml (két-70 szer) 2

8. CH2CI2 mosás-80 ml (háromszor) 3

8

9. Boc-aminosav (10 mmól) vagy DMF vagy CH2C12 (30 ml) oldata az adott, védett aminosav oldhatóságától függően (egyszer) -Fdiciklohexil-karbodiimid (10 mmól) CH2C12-2o ban 30—300

10. MeOH mosás-40 ml (kétszer) 3

11. TEA 12,5% CH2CI2-ban-70 ml (egyszer) 3

9c 12. MeOH mosás-30 ml (kétszer) 3

13. CH2C12 mosás-80 ml (kétszer) 3

A 13 lépés után ninhidrid próbát végzünk mintányi mennyiséggel: amennyiben a pró- 30 ba negatív, a folyamatot az 1. lépéstől a következő aminosav kapcsolásával újrakezdjük; amennyiben a próba pozitív, vagy enyhén pozitív, megismételjük a 9—13. lépéseket.

35

5