199159. lajstromszámú szabadalom • Eljárás véralvadásgátló peptidek és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

199159

A találmány a 006,417 számú 1987. január 23-án benyújtott amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés kiegészítő és folytatólagos része. A találmány tárgya eljárás véralvadásgátló hatással rendelkező új peptidek előállítására.

A véralvadásgátló szerek gyógyszerészeiben használatos anyagok például az akut mélyvénás trombózis, a tüdőembólia, más végtagi artériás akut embólia, szívizom infarktus, és szétszórt éren belüli koagulálás kezelésére. A véralvadásgátlók megelőző adagolása megakadályozza szívizom reumatikus vagy érelmeszesedéses megbetegedésben szenvedők embóliájának kiújulását és megakadályozza bizonyos tromboembólikus komplikációk kialakulását sebészeti beavatkozás esetében. A véralvadásgátlók ugyancsak adagolhatok szívkoszorúér és agyi ér megbetegedésben szenvedők kezelésére is. Az artériás trombózis különösen a szivet és az agyat ellátó artériák esetében az egyik fő elhalálozási ok napjainkban.

A hirudin egy 65 egységből álló polipeptid, amelyet a piócák nyálmirigyéből izoláltak. Ez egy véralvadásgátló hatású anyag és a thrombin specifikus inhibitora. Ámbár hatásossága jó, a pióca nyálmirigyéből izolált hirudin klinikai alkalmazhatósága mégis kicsi, mivel egyrészt kis mennyiségben áll rendelkezésre, másrészt drága és beadagolása után, mint minden ilyen méretű fehérje beadagolásakor, allergiás mellékhatások lépnek fel.

A találmány tárgya eljárás a hirudin egy speciális részletének előállítására, amely legalábbis részben véralvadásgátló hatásának oka. Ezt a molekularészletet szintetikusan előállítottuk és a molekula, valamint bizonyos analógjai a thrombin felismerési helyéhez kötődnek, de nem az enzimatikus hasítás aktív helyéhez, amely térbelileg elkülönül. A szintetikus peptidek megkötődése kompetitiv módon megakadályozza a fibrinogén kötődését a thrombin felismerési receptorhoz, ami előfeltétele lenne a fibrin képződésnek és a vérrög kialakulásának. A találmány szerinti eljárással előállított peptidek jelentős véralvadásgátló hatással rendelkeznek, amiatt a speciális jellemzőjük miatt, hogy csak a felismerési aktív helyhez kötődnek, de nem kötődnek a thrombin enzimatikus hasítási receptorhoz, és így lehetővé teszik egy tudományosan érdekes és terápiás szempontból pedig jelentős új véralvadásgátló terápia kifejlesztését.

A J.L. Krstenanskyet. a!., FEBS LETTERS 211 (1), 10—16 (1987) N-alfa-acetil-hirudin 45—65 szilárd fázisú eljárással végzett szintézisét ismerteti. A szóbanforgó peptidekkel végzett vizsgálatok azonban azt mutatták, hogy a hirudin 45—65 c-terminális maradéka tartalmaz egy kötési területet, mely felismeri ugyan a thrombint, mégsem kötődik az enzim katalitikus részéhez.

2

1

A találmány tárgya eljárás az X-A,-A2-A3-A4-A5-A6-A7-Ag-A9-A10-Y (I) általános képletű véralvadásgátló hatású peptidszármazék előállítására, ahol az általános képletben

X jelentése egy terminális aminocsoport maradék, amely lehet hidrogénatom, Suc, Mal, Glt, Fűm vagy egy 1—4 szénatomszámú alkanoilcsoport;

A, jelentése egy kötés vagy Asp, Gly-Asp, Gly-Ala, Asn-Asp-Gly-Asp, Ser-His-Asn-Asp-Gly-Asp, Thr-Pro-Lys-Pro-GIn-Ser-His-Asn-Asp-Gly-Asp vagy Thr-Pro-Asn-Pro-Glu-Ser-His-Asn-Asn-Gly-Asp;

A2 jelentése Phe, p-halogén szubsztituált Phe, p-nitro-Phe, béta-(tienil)-Alá, Tyr, Trp, O-metil-Tyr, Tha vagy Npa;

A3 jelentése Glu;

A4 jelentése Alá, Glu, Pro;

As jelentése Ile, Val, Leu, Nie vagy Phe; Ag jelentése Pro, Hyp, 3,4-dehidro-Pro, Sar, NMePgl, vagy D-Ala;

A7-A8 jelentése Glu-Glu, Ala-Glu, Glu-Asp,

Glu-Ala vagy Gln-Glu dipeptid;

A9 jelentése lipofil aminosav, amely lehet Tyr, Tyr(S03H), Phe, Leu, Nie, Ile, Val, Cha és Pro vagy egy dipeptid, amely lehet Tyr-Cha, Pro-Cha, Tyr-Leu, Glu-Leu, Ala-Tyr, Ala-Phe, Tyr-Tyr,

Ala-His, Ala-Leu, Ala-Cha vagy Leu-Phe dipeptid;

A10 jelentése kötés, vagy Ala, Gin, Pro, Glu, Orn, Lys, D-Lys, Asp, Leu, Asn, D-Glu, D-Asp vagy Leu-Gin, Asp-Glu, Leu-Ala, Phe-Lys, Cha-GIn, Cha-D-Glu, Leu-Pro, Leu-Orn, Tyr-Glu vagy Tyr-Gln dipeptid;

Y jelentése terminális karboxilcsoport maradék, amely lehet hidroxilcsoport vagy aminocsoport.

, A találmány szerinti eljárás leírásában az alábbi aminosav elnevezés rövidítéseket alkalmazzuk:

Gly - glicin,

Alá - alanin,

Val - valin,

Cha -ciklohexil-alanin,

Orn - ornitin,

Glt - glutaril,

Mal - maleil,

Npa - béta- (2-naftil)-alanin,

Leu - leucin,

Ile - izoleucin,

Pro - prolin, *

Phe - fenil-alanin,

Trp - triptofán,

Ser - szerin,

Thr - treonin,

Cys - cisztein,

Tyr - tirozin,

Asn - aszparagin,

Gin - glutamin,

Asp - aszparaginsav,

Glu - glutaminsav,

Lys - lizin,

2

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65