199151. lajstromszámú szabadalom • Eljárás bisz-foszfonsav-származékok előállítására
199151 ifjúkori reumás artritisz (beleértve a Still-kórt), merevgörcsös csontvelőgyulladás, pszoriatikus artritisz, Reiter-kór, stb; reumás láz (akut reumás artritisz); artritiszes szimptómákat okozó megbetegedések, így többek között köszvényes és metabolikus ízületi megbetegedések, például a köszvény, pszeudoköszvény, Wilson-kór; tüdő hipertrófiás ízületi gyulladása, sarcoidosis, fekélyesedő colitis, csipőbélgyulladás, Whipple-kór; májmegbetegedések, hemofiliás artritisz, hemoglobinopathia, hemochromatosis járulékos pajzsmirigy-hyperergasia, hypothyroidismus (pajzsmirigy csökkent működése), szisztémikus scleroderma (dermatosclerosis), szisztémikus bőrtuberkolózis, a Behcet-szindróma, traumatikus ízületi gyulladás, valamint fertőzéses ízületi gyulladások, így például a genynyesedő ízületi gyulladás. A következőkben azokat a kísérleti módszereket, illetve eredményeket ismertetjük, amelyek bizonyítják a találmány szerinti (I) általános képletű vegyületek farmakológiai hatékonyságát. (I) Hypercalcemia (emelkedett vérkalciumszint) vonatkozásában kifejtett gátló hatás A kísérletekben mellékpajzsmirigy-hormon (paratiroid hormon; a továbbiakban a „PTH" rövidítéssel fogjuk jelölni) beadása útján kiváltott hypercalcemiában szenvedő patkányokat használunk, és a kísérleti vegyület beadása következtében a vérszérum kalciumtartalmában bekövetkező csökkenést mérjük. Kísérleti módszer A Peptide Laboratory cég által gyártott humán 1—34 PTH-ból 30 p/kg dózist feloldunk olyan fiziológiás konyhasó oldatban, amely 0,1% BSA-t (borjuszérum-albumin) tartalmaz, így ml-ként 6 pg PTH-t tartalmazó fiziológiás konyhasó oldatot állítunk elő. Ebből az oldatból intravénásán injektálunk 30 pg/kg dózist (azaz az oldat térfogatára vonatkoztatva testsúlykg-ként 5 ml-t) olyan 5 hetes hím Wistar-patkányoknak, amelye-7 két előzetesen 20 órán át éheztettünk. Szokásos módon normál kontrollcsoportnak csak. 0,1% BSA-t tartalmazó fiziológiás konyhasó oldatot injektáltunk. 45 perccel a PTH-in- 5 jekció beadása után a patkányokat éterrel elkábítjuk, majd celiotomia-nak vetjük alá, amelynek során a vért a hasüregből vákuummal működtetett vérgyűjtő csővel összegyűjtjük. A vért azonnal 3000 fordulat/perc se- 10 bességgel centrifugálásnak vetjük alá 4°C- on 10 percen át a vérszérum elkülönítése céljából. A vérszérumban a kalciumionok (Ca++) koncentrációját azonnal megmérjük a Horiba Manufacturing Co. japán cég által 15 Sera 250 márkanéven forgalomba hozott kalciumion-mérőberendezéssel. A találmány szerinti vegyületeket feloldjuk nátrium-hidroxidot és sósavat használ- 20 va 7,4 pH-értékű fiziológiás konyhasó oldatban szubkután beadás céljából olyan mennyiségekben, hogy a dózis 2 ml/kg legyen, illetve orális beadás céljából 7,4 pH-értékű desztillált vízben olyan mennyiségekben, hogy 25 a dózis 5 ml/kg legyen. A PTH-injektálás után 24 vagy 72 órával beadjuk a találmány szerinti vegyületeket. A normális kontrollcsoportnak és a kontrollcsoportnak fiziológiás konyhasó oldatot vagy desztillált vizet adunk 3Q be. Fiziológiás konyhasó oldatban feloldunk az Armour Co. által gyártott lazaccalcitonint ( a továbbiakban ezt az anyagot az „SCI" rövidítéssel fogjuk jelölni) olyan mennyiségben, hogy a dózis 2 ml/kg-nak feleljen meg, 35 majd a PTH-injektálás után 30 perccel szubkután beadjuk. Mindegyik csoport esetében az eredményeket „átlag± standard hiba" értékben fejezzük ki, és az egyes csoportok eredményeit 40 összehasonlítjuk úgynevezett egyutas variáció analízissel. A szignifikancia szintet 5%-nak vesszük. Eredmények: Az 1. és 2. táblázatban adjuk meg a szubkután, illetve orális beadás során kapott eredményeket. 8 1. táblázat Szubkután beadás (a PTH-injektálás előtt 24 órával beadva) Kísérleti vegyület Dózis (/kg) N _ / _ + + Szerűm Ca (mmól/liter) normál kontroll — 5 1,40 ± 0,01** kontroll 12. példa szerinti — 5 1,56 ± 0,01 vegyület 14. példa szerinti 30 mg 5 1,44 ± 0,02** vegyület 30 mg 5 1,45 ± 0,02** 6
