198796. lajstromszámú szabadalom • Eljárás anioncserélő hordozólapok előállítására és szilárdfázisú eljárás és berendezés nukleinsavfragvensek szekvenciájának megállapítására
7 HU 198796 B 8 egy négyzet- vagy kocka alakú - természetesen más alak is lehetséges - alaptómbból áll, amelybe a reaktor edények behelyezhetók, vagy be vannak munkálva. A reaktor edények száma az analizálandó minták számától függ. A tömbön egy jelzés adja meg a berendezés többi alkatrészeinek csatlakoztatási helyzetét. A fedél úgy van elkészítve, hogy pontosan a szekventáló tömbre illeszkedik és emellett minden egyes behelyezett reaktor edényt tömören lezár. A fedél egy merev, nem deformálható lapból, a reaktor edényeket lezáró és a lapra erősített rugalmas tömítésből és a szekventáló tömbhöz csatlakozó rögzítő elemekből áll. A találmány szerinti berendezéshez tartozik továbbá egy mintaadagoló, amely a folyékony mintáknak a hordozó lapra történő egyidejű felvitelére szolgál. Az adagoló a szekventáló tömbben meglévő reaktor edények számának megfelelő számú egyenlő hosszúságú kapillárisból áll, amelyek egy kapilláris tartóban helyezkednek el és helyzetük megfelel a reaktor edények helyzetének, azaz minden egyes reaktor edényhez tartozik egy kapilláris. Ebben az esetben is jelzésekkel és roegvezetésekkel érjük el, hogy egy kapillárishoz mindig ugyanaz a reaktor edény tartozzon. A hordozó lapon található, megkötött minták kivágására és egyidejűleg a szekventáló tömbben lévő reaktor edényekbe juttatására szolgáló, találmány szerinti szétvágó egység egy lapból és a lapba rögzített szétvágó rudacskákból áll. A rudacskák száma és elhelyezkedése megfelel a szekventáló tömbben lévő reaktor edényeknek. A hordozó lapokat a hordozó lap tartóba helyezve a tartót szekventáló tömbre rögzítjük előirt, egyértelmű helyzetben és csak ezután következhet a minta adagolása és a szétvágás. A minta adagolása a szekventáló tömbön kívül is megtörténhet. A berendezés alapösszetételéhez célszerűen őt szekventáló tömb, négy fedél, négy hordozó lap tartó, egy mintaadagoló és egy szétvágó egység tartozik. A szekventáló eljárás végrehajtásakor minden lényeges művelet vagy a szekventáló tömbbel vagy a szekventáló tömbben történik. Ez figyelemre méltó előny, amely hatékony munkavégzést tesz lehetővé és kizárja a minták összekeveredésének lehetőségét. A találmány közelebbi megvilágitására megvalósitási példákat és ábrákat is közlünk. 1. ábra Szekventáló tömb a) Felülnézet, félmelszet fedéllel b) Metszet fedéllel c) Mélyhúzott reaktor edényekkel 2. ábra a) Mintavétel b) Minta adagolás 3. ábra Szekventáló tömb szétvágó egységgel 4. ábra Az eljárás vázlata Cellulóz-papirt, például Whatman 540-es papírt a 134.025 sz. európai szabadalom szerint ciariur-kloriddal aktiválunk és azonnal becsomagoljuk. Az ilyen nődön felületkezelt 5x7 cm-es papirt speciális csomagolásából (lehegesztett fólia, N2 atmoszférában -20 °C hőmérsékleten tárolva) kivesszük és üvegből készült reakciós kamrába helyezzük és 7 ml acetonitrilben oldott 2 mmól (450 mg) trietil-1-amino-etil-animóniniii-bromid oldatával kezeljük. A reakciós kamrát kb. 12 órán ét szobahőmérsékleten rázatjuk. A reakció befejezése után a papírt többször vízzel mossuk és itatóspapír között szárítjuk. Az acetonitri) helyett vizes puffer-rendszereket is alkalmazhatunk. 1. példa 2. példa 400 mg kristályos, nem átalakított cellulózt a 134.025 sz. európai szabadalom szerint cianur-kloriddal aktiválunk és ezt követően 25 ml-es göinblombikban 7 ml acetonitrilben oldott 2 mmól (450 mg) trietil-l-amino-etil-ammónium-bromid oldaléval 12 órán ét szobahőmérsékleten reagállatjuk. A reakció befejezése után a cellulózt üvegszűrőn többször vízzel átmossuk és az 1. példában megadottak szerint szárítjuk. 3. példa Cellulóz-(Whatman 540-es)-papirt az 1. példában leírtak szerint cianur-kloriddal aktiválunk és ezt követően üvegből készült reakciós kamrába helyezzük, amelyben mér 7 ml acetonitrilben oldott 2 mmól (410 mg) 1- -bróm-2-amino-etán-hidrobromid oldata van. A reakciót 5 ml Irietil-amin hozzáadásával indítjuk. A reakciós kamrát parafilmmel lelőmitjük és kb. 12 órán ét szobahőmérsékleten rázatjuk. A reakció befejezése után a papirt az 1. példában leírtak szerint mossuk és szárítjuk. 4. példa 400 mg kristályos, nem átalakított cellulózt (például Whatman) a 2. példában leírtak szerint aktiválunk és ezt követően 25 ml-es gömblombikban 7 ml acetonitrilben oldott 2 mmól (410 mg) 1-1; róm-2-amino-elár*-,hidrobromidot adunk hozzá. A reakciót 5 ml trietil-amin hozzáadásával indítjuk és 12 óra elteltével szobahőmérsékleten a cellulóz 2. példa szerinti mosásával és szárításával fejezzük be a folyamatot. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 05 6
