198757. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nebramicin komponensek előállítására
9 HU 198757 B 10 3. példa a. ) Az 1. példában leírtak szerint készült inokulum 50 literével beoltunk 700 ml saválló acél fermentorban 60 percen át slerilezett csapvízzel készüli 2.a.) példában leírt összetételű főfermentációs táptalajt azzal a különbséggel, hogy itt mangán-szulfát helyett cink-szuifátot tartalmaz a táptalaj. A fermentációt a 2.a) példában leírtakkal azonos paraméterek szerint futtatjuk. A fermentlé 140 órás korban literenként 3,15 g nebramicin 2-t, 0,296 g nebramicin-4- -et és 2,975 g nebramicin-5’-t tartalmaz. b. ) A 3.a.) példa szerint táptalajon és paraméterek mellett fermentálunk, azzal a különbséggel, hogy a tenyésztési hőmérséklet a fermentáció 70, órájától leengedésig 37 °C-ról 39 °C-ra emeljük. Az így előállított 140 órás fermentlé literenként 2,95 g nebramicin-2-t, 0,107 g nebramicin-4-et és 3,195 g nebramicin-5’-t tartalmaz. A kinyert anyagok minőségi paraméterei megegyeztek az 1. példában megadott értékekkel. 4. példa A 3.a, példa szerinti táptalajon és paraméterek mellett fermentálunk azzal a különbséggel, hogy az inokulumot a NCAIM (B) P 000170 deponálási számú Streptomices tenebrarius törzs vegetatív tenyészetével oltjuk és a tenyésztési hőmérsékletet a fermentáció 70. órájától a befejezésig 37 °C-ról fokozatosan 41 °C-ig emeljük. Az így előállított 140 órás fermentlé literenként 2,42 g nebramicin-2-t, 0,283 g nebramicin-4-et és 3,327 g nebramicin-5’-t tartalmaz. A kinyert anyagok minőségi paraméterei megegyeztek az 1. példában megadott értékekkel. Vékonyréteg-kromatográfiás (VRK) azonosítási és tisztasági vizsgálat: Réteg: Kieselgel G Whatman K5 lemez Futtatószer: 2,5 molos nátrium-klorid 30 tfX etil-alkoholt tartalmazó vize6 oldata Előhívás: a.) 0,5 tX-os nátrium-hipoklorit oldat b. ) 96X-os etil-alkohol c. ) kadmium-jodid - keményítő reagens (1,1 g kadmium-jodid és 1,5 g keményítő 100 ml vízben) SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás 6"-0-karbamoil-tobramicin, 6"-0- -karbamoil-kanamicin és apramicin előállitásá-5 ra a 6"-0-karbamoil-tobramicin vagy 6"-0- -karbamoil-kanamicin mennyiségének szelektív növelésével NCAIM B (P) 000169 vagy NCAIM B (P) 000170 szám alatt deponált Streptomyces lenebrarius törzzsel vagy azok, 10 a fenti nebramicin komponenseket termelő valamely mutánséval vagy variánséval beoltott táptalajon, amely 4,0-5,0 tX glükózt, 3,0- -3,8 tX szójuliszlet, 0,3-0,8 tX kazeinhidrolizálumot, 0,3-1,2 t% nátrium-glutamátot, 3,2- 15 -4,0 t% növényi olajokat, továbbá ammóniumsót és egyéb ásványi sókat tartalmaz, 120- -160 óláig folytatott tenyésztéssel, majd az antibiotikumoknak a fermentléből ismert módon történő kinyerésével azzal jellemezve, 20 hogy a táptalajhoz 0,1-0,2 tX mennyiségben cink- és/vagy mangánsókat, előnyösen 0,1- -0,15 tX cink- és/vagy mangánszulfátot adagolunk, és a 6"-0-karbamoil-tobramicin mennyiségének növelésére 0,1-0,5 levegő 25 tf/táptalaj tf/perc, előnyösen 0,1-0,25 levegő tf/táptaiaj tf/perc, a 6"-0-karbamoil-kanamicin mennyiségének növelésére 1,0-1,2 levegő tf/táptalaj tf/pei'c, előnyösen 1,0 levegő tf/táptalaj tf/perc mértékű levegőztetést al- 30 kalmazunk, miközben kevertetés mellett a hőmérsékletet 37-41 °C között tartjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a hőmérsékletet a fermentáció kezdetétől számított 70. órában 39 °C-ra, 35 majd a fermentáció végéig fokozatosan 41 °C-ra emeljük. 40 45 50 55 A kiadásért felel: Himer Zoltán osztályvezető KJK Kiadja az Országos Találmányi Hivatal, Budapest -R-4865 -90.2313.66-13-2 Alföldi Nyomda Debrecen - Felelős vezető: Benkő István vezérigazgató 7
