198757. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nebramicin komponensek előállítására
5 HU 198757 B 6 Táptalaj összetétel (tX) Táptalajok jele Táptalaj komponensek NF-7 NTF-7/1 NTF-7/2 NTF-8 NTF-8/1 NTF-8/2 glükóz 4,4 4,4 4,4 4,4 4,4 4,4 szójaliszt 3,0 3,0 3,0 3,5 3,5 3,5 kazelin hidrolizátum (enzimmel) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 mono-nátrium-glu tárnát 0,3 0,3 0,3 1,0 1,0 1,0 ammónium-klorid 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 ammónium-nitrát 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,05 kalcium-karbonát 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 magnézium-szulfát.7H20 0,5 0,5 0,5 1,0 1,0 1,0 mangán-szulfót.7H20 0 0,15 0 0 0,15 0 cink-szulfát.7H20 0 0 0,10 0 0 0,10 kobalt (II)nitrát.6H20 0,001 0,001 0,001 0,001 0,001 0,001 pálmaolaj 1,5 1,5 1,5 1,6 1,6 1,6 szójaolaj 1,5 1,5 1,5 1,6 1,6 1,6 0,3-0,8 tX kazein-hidrolizátumot, 0,3-1,2 tX szójaliszt 2,0 tX nátrium-glutamátot, 3,2-4,0 tX növényi olajokazein hidrolizátum kát, továbbá ammóniumsót és egyéb ásványi (enzimetikusan sókat tartalmaz, 0 ,1-0,2 tX cink- és/vagy hidrolizált) 0,3 tX mangónsót, előnyösen 0,1-0,15 t% cink-5 ammónium-nitrát 0,1 tx és/vagy mangánszulfátot adunk és 0,1-1,2 ammónium-klorid 0,3 tX levegő tf/táptalaj tf/perc arányú levegöztekalcium karbonát 0,3 tX tés és kevertetés mellett a hőmérsékletet 37-magnézium-szulfát-41 °C között tartjuk. A tenyésztést 120-160-heptahidrát 0,5 tX óráig folytatjuk. 10 kobalt ( 11)—nitrát 0,001 tx Eljárásunk szerint, amennyiben 6"-0-pálmaolaj és szójaolaj-karbamoil-tobramicin mennyiségének növelé-1 : 1 arányú elegye 3,0 tX se a cél, 0,1-0,25 levegő tf/táptalaj tf/perc glükóz (külön 50%-os arányú levegőztetést, amennyiben 6”-0-karoldatként steribamoil-kanaraicin B termelés a cél, 1,0 levegő 15 lezve 2,0 tX tf/táptalaj tf/perc levegóztetési arányt alkalmazunk. A találmány szerinti előnyös megoldásnak megfelelően a hőmérséklet változtatását oly módon valósítjuk meg, hogy a fermentá- 20 ció kezdetétől számított 70. órában a hőmérsékletet 39 °C-ra emeljük, majd a fermentáció végéig (120-160 óra) fokozatosan 41 °C-ig emeljük. Találmányunkat az alábbi példákban 25 részletezzük, anélkül, hogy oltalmi igényünket azokra korlátoznánk. 7. példa 30 Nebramicin-2, nebramicin-4 és nebramicin-5’-t tartalmazó tenyészlevek előállítása 2000 1-es félüzemi fermentorban. Streptomyces tenebrarius törzs [deponálási szám: 35 NCAIM B(P)-000169] vegetativ tenyészetével az alábbi összetételű, csapvízzel készült 2000 ml térfogatú Erlenmeyer-lombikban sterilezett 500 ml táptalajt oltunk: A táptalaj pH-ját sterilezés előtt vizes ammónium-hidroxid oldattal 7,2-re állítjuk be, majd 121 °C hőmérsékleten 40 percen át autoklávban sterilezzük. A tenyésztést 16-18 órán ót 2,5 cm átmérőjű kör mentén percenként 270-et forduló sikrózógépen 37 °C-on végezzük. Az így kapott 500 ml vegetatív oltóanyaggal 600 1 térfogatú kísérleti üzemi fermentorban 121 °C hőmérsékleten 60 percen ót sterilezett 400 1 térfogatú, az oltóanyaggal azonos összetételű táptalajt oltunk. A tenyésztést 37 °C-on végezzük, 400 1 levegőt vezetünk ét percenként, és 160-at forduló keverót működtetünk. 18 óra múlva a kifejlett inokulumból 50 literrel beoltunk 700 1 saválló acél fermentorban 60 percen ót sterilezett, csapvízzel készült alábbi összetételű főfermentációs táptalajt: 5
