198684. lajstromszámú szabadalom • Eljárás oxi-szalicil-amido származékok és a vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 198684 B 2 Ez a dózis és az adagolási mód nagyon egyenletes választ és erősségében igen kis eltérést eredményezett. Emellett az apomorfin szubkután adagolva szintén nagyon állandó túlzott aktivitást okozott. Az injekció után közvetlenül az állatokat a ketrecekbe helyeztük, minden ketrecbe egyet. A kialakult sztereotipiákat két független módszerrel értékeltük. Az első értékelési rendszer Costalli és Naylor (1973) által bevezetett rendszer egy módosított változata. A sztereotipiák erősségét egy O-lól 3-ig terjedő skálának megfelelően értékeltük a következőképpen: Értéke_________A sztereotip viselkedés leírása 0 A konyhasó vagy szedált kontrolihoz képest nincs változás 1 Nem folyamatos szaglálás 2 Folyamatos szaglálás 3 Folyamatos szaglálás. Rágás, harapás, nyaldosás A második rendszerben az apomorfin által okozott hiperaktivitást mutató állatok számát értékeltük. Minden csoport 6 — 8 állatból állt. Konyhasó kontrollt egyidejűleg mindig futtatunk. Az első (0 — 3 skála) értékelő rendszerben az EDF50-ek azok a dózisok, amelyek a 60 perc megfigyelési idő alatt a sztereotipiák erősségét 50%-ka csökkentik. A második rendszerben azok az ED50 értékek, amelyek a 60 perces megfigyelési idő alatt a hiperaktivitást mulató állatok számát 50%-ka csökkentik. Az ED50-t a log dózis-válasz görbékből számítottuk a legkisebb négyzetek módszerével 4 — 6 dózis szintből és dózisszintenként 6 — 8 állatot vizsgálva. Az antipszichotikus szerek klinikai hatékonyságáról kimutatták, hogy kapcsolatban van azzal a képességükkel, hogy dopamin receptor preparátumokból a triciált spiperont helyettesíteni tudják [Seeman, Biochem. Pharmacol. 26, 1741 (1977)]. Módszer Búrt és munkatársai [Proc.Nat.Acad.Sci.USA 72, 4655/1975] módszerét használtuk. 150 — 200 g-os Sprague-Dawley patkányokat lefejeztünk, és az agyukat gyorsan eltávolítottuk. A csíkolt részt elválasztottuk, összegyűjtöttük és 50 mM- os Trisz-HCl pufferben (pH 7,6) homogenizáltuk. A membránfrakciót centrifugálással összegyűjtöttük (48000 g 10 percig), egyszer mostuk a pufferrel, majd 50 mM-os Trisz-HCl pufferben újra szuszpendáltuk, amely 0,1% aszkorbinsavat, 10 oiM pragyline-t, 2 mM kalcium-kloridot és 1 mM magnézium-kloridot tartalmazott. A szuszpenziót 10 percig 37 °C-on előinkubáltuk, majd felhasználásig jégen tartottuk. A kísérleteket sejttenyésztésre alkalmas készülékben végeztük. Az inkubálásokat négyszeres ismétlésben végeztük, mindegyik forrás 2,5 mg/0,5 ml membránszuszpenziót, 0,4 nM 3H- spiperont és a vizsgált vegyületet tartalmazta 0,5 ml végtérfogatban! 10 perces, 37 ®C-on való inkubálás után az egyes mintákat gyorsan szűrtük és Whatman GC/B szűrőn mostuk sejtgyűjtőt használva. A specifikus kötődést 1 mikrontól (+ )-butaclamol jelenlétében és távollétében kötött ligand különgségeként határoztuk meg. A vizsgálati eredményeket IC5o értékként fejetük ki. Az ICjq mikromólban megadva azt a vizsgálati anyag koncentrációt jelent, amely a specifikusan kötött spiperone mennyiségét 50%-kal csökkenti. VIZSGÁLATI EREDMÉNYEK A vizsgálati eredmények a következő táblázatban láthatók: In vivo In vitro A sztereo-A hiper- 3H-spipe-A vizstipiák aktivitás rone gált csökken-csökken- kötés tése tése blokkolása vegyület ED50 Ed5o IC50 (/imól/kg i.p.) (/imól/kg i.p.) (/*mól) Ismert: A 6,5 0,86 1,57 B 2,4 0,11 0,026 Találmány szerinti: 24.10^ IH 26:10"2 10,10-3 IB 4,2.10'2 5.IO-3 IO.IO-4 IF 5,8.10'2 0,7. IO'3 7.10-4 Megjegyzések a vizsgálati eredményhez: A találmány szerinti vegyületek az ismert vizsgált vegyületeknél sokkal jobb antidopamin hatást mutattak mind in vivo, mind in vitro. Az apomorfinnal patkányokban indukált sztereotipiák gátlását illetően hatásuk 50 — 150-szer bizonyult jobbnak az ismert, vizsgált vegyületekénél. Emellett az apomorfin-indukált hiperaktivitást blokkoló EDso dózis és a sztereotipiákat blokkoló ED50 dózis között nagy a különbség, ami a specifikus dopamin neuronokra gyakorolt meglehetősen szelektív hatásra utal. Ezek: a tulajdonságok a technika állásához tartozó vegyületek ismeretében nem voltak várhatók. A receptor kötődés in vitro tanulmányozása bizonyítja a találmány szerinti vegyületek in vivo talált nagy hatását. A találmány szerinti vegyületeknek a patkány agy sztriatalis preparátumaiban a 3H-spiperone-t helyettesítő hatékonysága sokkal nagyobb, mint a vizsgált, ismert vegyületeké. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás az 1 általános képletű vegyületek — ebben a képletben Z1 hidroxilcsoportot, aminocsoportot, vagy - OR1 általános képletű csoportot jelent, amelyben R1 14 — 18 szénatomos alkil-karbonil-csoport: Z* 1 — 4 szénatomos alkoxicsoport; 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 13
